CD4+iNKT細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)性過(guò)敏性鼻炎發(fā)病中的作用.pdf

1、過(guò)敏性鼻炎是一種常見(jiàn)病,多發(fā)病,在全世界范圍來(lái)說(shuō)其發(fā)病率為10％～25％,且呈不斷上升趨勢(shì)。盡管過(guò)敏性鼻炎不是一種致命的疾病,但是也明顯地影響患者的生活質(zhì)量。在一些國(guó)家,甚至成為一個(gè)社會(huì)問(wèn)題。過(guò)敏性鼻炎的發(fā)病機(jī)制中傳統(tǒng)的“Th1-Th2失衡理論”還有很多現(xiàn)象無(wú)法解釋,很多證據(jù)表明Th1-Th2的反應(yīng)失衡很可能只不過(guò)是過(guò)敏性疾病發(fā)病的冰山一角。NKT細(xì)胞的發(fā)現(xiàn),也許會(huì)對(duì)過(guò)敏性疾病的發(fā)病機(jī)制有著有著進(jìn)一步深入的了解。
　　NKT細(xì)胞是

2、一類(lèi)特殊的細(xì)胞亞群,它既表達(dá)T細(xì)胞的表面標(biāo)志如TCR,CD3等,也表達(dá)NK細(xì)胞表面的一些特異的分子如,NK1.1(NKR-PIC),CD161,CD16,CD122等。研究者發(fā)現(xiàn),NKT細(xì)胞存在不同的分布,NKT細(xì)胞可迅速分泌大量具有免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子,如IL-4,IFN-γ,IL-10和IL-13,調(diào)節(jié)體內(nèi)的免疫反應(yīng)。
　　α-Galcer是一種脂類(lèi)物質(zhì),有研究表明α-Galcer可以刺激NKT細(xì)胞增值,產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子參

3、與免疫調(diào)節(jié),因此及它的類(lèi)似糖脂類(lèi)物質(zhì)已經(jīng)逐漸引起人們的關(guān)注,廣泛運(yùn)用腫瘤、感染性疾病及自身免疫疾病的相關(guān)研究。但目前為止尚未見(jiàn)NKT和過(guò)敏性鼻炎的關(guān)系的研究,本實(shí)驗(yàn)即來(lái)了解在實(shí)驗(yàn)性過(guò)敏性鼻炎發(fā)病過(guò)程中NKT細(xì)胞浸潤(rùn)情況,以及通過(guò)α-Galcer對(duì)NKT的影響途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)多過(guò)敏性鼻炎的影響,以便進(jìn)一步確認(rèn)CD4+iNKT細(xì)胞在過(guò)敏性疾病中所擔(dān)當(dāng)?shù)慕巧?br>　　目的:探討過(guò)敏性鼻炎發(fā)病過(guò)程中CD4+iNKT細(xì)胞浸潤(rùn)情況以及α-Galcer

4、所介導(dǎo)的CD4+iNKT細(xì)胞調(diào)控對(duì)過(guò)敏性鼻炎發(fā)病的影響。
　　方法:將45只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為A:過(guò)敏性鼻炎組,B:生理鹽水對(duì)照組,C:α-Galcer干預(yù)組。A組以卵清白蛋白(OVA)致敏建立過(guò)敏性鼻炎模型,B組以生理鹽水代替卵清白蛋白(OVA)作為空白對(duì)照,C組在過(guò)敏性鼻炎造模的最后一周,腹腔連續(xù)注射α-Galcer進(jìn)行干預(yù)。比較各組小鼠過(guò)敏性鼻炎癥狀評(píng)分,鼻粘膜嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)計(jì)數(shù),鼻粘膜組織形態(tài),免疫酶標(biāo)技術(shù)

5、檢測(cè)各組鼻粘膜CD4+iNKT細(xì)胞的浸潤(rùn),流式細(xì)胞技術(shù)(Flow Cytometry,FCM)檢測(cè)鼻腔灌洗液中的CD4+iNKT細(xì)胞,RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)檢測(cè)各組鼻腔灌洗液的Vα14的基因表達(dá),ELISA檢測(cè)各組血清IgE水平以及鼻腔灌洗液的IL-4和IFN-γ水平。運(yùn)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:1.癥狀評(píng)分:A組評(píng)分(

6、7.3±1.0),較B組(0.7±0.6)C組(3.9±1.1)明顯增高(p＜0.01),B組評(píng)分明顯低于C組(p＜0.01)。2.嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù):A組(7.5±1.2)較B組(0.4±0.5)C組(1.53±0.74)明顯提高(p＜0.01),C組高于B組(p＜0.05)。3.鼻粘膜組織形態(tài):HE染色見(jiàn)A組纖毛結(jié)構(gòu)大量脫落,組織水腫,小血管增生,粘膜上皮下固有層嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn),淋巴細(xì)胞浸潤(rùn);B組C組均無(wú)明顯嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn),纖毛結(jié)

7、構(gòu)完整。4.鼻粘膜CD4+iNKT細(xì)胞浸潤(rùn)情況:A組粘膜下有多量的CD4+,NK1.1染色細(xì)胞,即CD4+iNKT細(xì)胞;B組僅見(jiàn)少量的CD4+細(xì)胞。5.鼻腔灌洗液流式細(xì)胞分析:CD4+iNKT細(xì)胞陽(yáng)性率A組(72.6％±0.0789)C組(83.7％±0.0515)明顯高于BN(0.49％±0.0013)(p＜0.01),C組高于AN(p＜0.05)。6..鼻腔灌注液Vα14mRNA表達(dá):A組和C組均顯現(xiàn)特異性條帶,B組未見(jiàn)特異性條帶顯

8、現(xiàn)。積分光密度:A組(0.3343±0.1585)較C組(0.3521±0.1239)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。7.血清總IgE濃度(ng/ml):A組(116.13±10.70)明顯高于B組(26.13±4.19:)C組(73.00±4.34)(p＜0.01),C組明顯高于B組(p＜0.01)。8.鼻腔灌洗液IL-4濃度(peJma):A組(238.4±22.0)明顯高于BN(7.6±1.5)和C組(15.5±1.6)(p＜0

9、.01),C組明顯高于B組(p＜0.01)。8.鼻腔灌洗液IFN-γ濃度(pg/ml):A組(31.6±6.9)明顯低于B組(132.2±13.2)和C組(162.8±12.3)(p＜0.01),C組高于B組(p＜0.05)。
　　結(jié)論:1.應(yīng)用OVA及C57BL/6鼠建立過(guò)敏性鼻炎的動(dòng)物模型方法簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì),模型致敏效果確切,出現(xiàn)典型的變應(yīng)性炎癥表現(xiàn),顯示造模成功。2.過(guò)敏鼻炎小鼠鼻腔有大量的CD4+iNKT細(xì)胞浸潤(rùn),其數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超