苦參堿誘導膽囊癌細胞GBC-SD周期阻滯及凋亡的實驗研究.pdf

1、膽囊癌是最常見的膽道系統(tǒng)惡性腫瘤，占消化系統(tǒng)惡性腫瘤的第五位。膽囊癌惡性程度很高，5年存活率低于5％。腫瘤高度惡性的生物學行為及早期診斷困難是膽囊癌患者預后不佳的主要因素。膽囊癌放射性治療效果不顯著，手術難以達到根治性切除。因此，進一步研究新的有效的治療方法是必要的，比如新的化療藥，介入治療和基因治療。苦參是傳統(tǒng)中藥，含多種生物堿，已廣泛應用于臨床。其有效成分具有抗寄生蟲、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗肝損傷等藥理作用，并有一定的調節(jié)免疫作用

2、。苦參堿是其有效活性成分之一，其分子式C15H24N20?，F(xiàn)在的研究發(fā)現(xiàn)，苦參堿能夠抑制腫瘤細胞增殖及誘導腫瘤細胞凋亡，其作用已經(jīng)在官頸癌、淋巴瘤、胃癌、肝癌、乳腺癌及肺癌中證實，盡管如此，目前尚無研究探討苦參堿抗膽囊癌細胞的作用及機制。本研究以不同濃度苦參堿及兩個時間點位作用于人膽囊癌細胞株GBC-SD，觀察不同濃度及不同時間點苦參堿對GBC-SD細胞增殖、凋亡影響及機制。
　　 目的：苦參堿(Matrine，Mat.)是從豆

3、科植物苦參(Sophora flavescens Ait.)，苦豆子(s.alopecuroides L)，廣豆根(s.subprostrata Chun et T.Chen)等中分離出來的生物堿，是白金雀兒堿(lupanine)的異構體，屬于四環(huán)的喹諾里西啶類(quinolizidine)，分子式為C15H24N20。本實驗的目的是研究苦參堿對人膽囊癌細胞的增殖抑制和誘導凋亡作用，并探討其機制。
　　 方法：不同濃度的苦參堿(

4、0.125，0.25，0.5mg/mL)作用于人膽囊癌GBC-SD細胞24，48小時。細胞增殖抑制試驗(MTT方法)觀察不同濃度苦參堿對膽囊癌細胞增殖抑制的影響；流式細胞術檢測細胞周期及凋亡；蛋白免疫印跡法(Western Blotting)檢測不同藥物處理后一些周期及凋亡相關蛋白表達水平的變化，包括Cdk2，Cdk4，Cdk6，CyclinE，CyclinD1，bax，bc1-2，caspase-3。統(tǒng)計學處理用SPSS13.0軟件完

5、成，計量資料數(shù)據(jù)表示方式以平均值±標準差(Mean±SD)，兩組計量資料采用非獨立樣本t檢驗，各組指標間的相關性采用Spearman等級相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學顯著性意義。
　　 結果：膽囊癌GBC-SD細胞經(jīng)過苦參堿(0.125，0.25，0.5mg/mL)處理24，48h后，細胞增殖抑制實驗(MTT)證實苦參堿能夠抑制GBC-SD細胞的增殖，并且其抑制作用呈現(xiàn)劑量、時間依賴效應。利用流式細胞儀分析藥物作用后的GB

6、C-SD細胞，檢測到G1期阻滯和凋亡。Western Blot結果顯示苦參堿可以明顯降低cyclinE、bc1-2的表達，以及檢測到bax的表達上調，caspase-3的激活。
　　 結論：本實驗以人膽囊癌細胞系GBC-SD為對象，研究苦參堿對膽囊癌細胞的增殖抑制和誘導凋亡作用。研究表明苦參堿可以明顯抑制膽囊癌細胞的增殖，導致細胞G1期阻滯，其周期阻滯可能與苦參堿下調cyclinE的表達有關。同時苦參堿可能通過下調bc1-2，上