苦參堿通過Bid誘導(dǎo)AIF入核引起肝癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制.pdf

1、廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當(dāng)方式明確標(biāo)明，并符合法律規(guī)范和《廈門大學(xué)研究釁黧篡≥勰啪橢一另外，該學(xué)位論文為(才滔礅1中I√欷豫)課題(組)的研究成果，獲得(胡夭鞍)課題(組)經(jīng)費(fèi)或?qū)嶒?yàn)室的資助，在(嘲戈瓢)實(shí)驗(yàn)室完成。(請(qǐng)?jiān)谝陨侠ㄌ?hào)內(nèi)填寫課題或課題組負(fù)責(zé)人或?qū)嶒?yàn)室名稱，未有此項(xiàng)聲明內(nèi)容的，聲明人(簽名)：同歡2DJ

2、弓年6月r日摘要肝癌是一種常見的惡性腫瘤，它嚴(yán)重威脅著人類的健康。然而，由于肝癌本身所具有的生物學(xué)特性，使其成為目前尚缺乏有效治療手段的疾病?？鄥A是從我國(guó)傳統(tǒng)中藥苦參的干燥根中提取出的一種生物堿活性成分，分子式為C15H24N20，具有廣泛的藥理學(xué)作用。近年來的研究表明，苦參堿能在體內(nèi)、外對(duì)多種腫瘤細(xì)胞起作用，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。然而，苦參堿誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制還不明確。本論文以人肝癌細(xì)胞系HepG2及裸鼠荷肝癌模型為研究對(duì)象，探

3、討苦參堿的抗腫瘤作用及原理。通過MTT法、PI染色法、流式細(xì)胞術(shù)，闡明了苦參堿對(duì)肝癌的增殖抑制、周期調(diào)控、誘導(dǎo)凋亡作用；使用WestemBlot、免疫熒光和免疫組化等方法全面探索了苦參堿誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡可能的分子機(jī)制。論文研究表明，苦參堿在體外可抑制HepG2細(xì)胞的增殖作用和誘導(dǎo)凋亡，呈時(shí)間和劑量依賴性，將細(xì)胞周期阻滯在G0／G1期。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，苦參堿可誘導(dǎo)Fas、FasL表達(dá)上調(diào)，Bid、Bcl一2表達(dá)下調(diào)，Bax表達(dá)上調(diào)和Casp

4、ase通路激活，這些結(jié)果表明苦參堿在體外是依賴于多條凋亡通路來誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞發(fā)生凋亡?？鄥A還能引起線粒體膜電位崩潰，ROS活性增高，核Bid轉(zhuǎn)位到細(xì)胞質(zhì)，部分Bid還可以轉(zhuǎn)位到線粒體，AIF從線粒體轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核。但不論是苦參堿誘導(dǎo)ROS的產(chǎn)生受抑制，還是Bid／AIF的表達(dá)受抑制，都可阻止苦參堿誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。同時(shí)，Tiron抑制ROS產(chǎn)生后，還可阻止由苦參堿誘導(dǎo)的AIF核轉(zhuǎn)位作用。此外，采用Bid抑制劑BI6C9和siRNA靜默技術(shù)

5、下調(diào)Bid蛋白表達(dá)，都可阻止AIF由線粒體轉(zhuǎn)位至核內(nèi)，提示苦參堿可通過Bid調(diào)控AIF入核誘導(dǎo)人肝癌HepG2細(xì)胞凋亡。最后，建立裸鼠皮下成瘤模型，證實(shí)有效劑量的苦參堿可以在裸鼠體內(nèi)抑制HepG2細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)，并同步觀察到Bid表達(dá)水平下調(diào)和AIF轉(zhuǎn)位入核。通過這些研究，較為詳細(xì)地闡明了苦參堿在體內(nèi)外對(duì)人肝癌細(xì)胞存活增殖的抑制作用與機(jī)制，為其作為基于Bid／AIF分子靶點(diǎn)的抗肝癌藥物開發(fā)奠定理論基礎(chǔ)，也為苦參堿在癌癥治療的臨床應(yīng)用提供