苦參堿通過(guò)Bid介導(dǎo)的線粒體通路誘導(dǎo)人食管癌細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、食管癌是一種高發(fā)的致命性惡性腫瘤,這些年來(lái)在美國(guó)及其他發(fā)達(dá)國(guó)家的迅速發(fā)展。在2011年確診的病例超過(guò)167200例,在中國(guó)發(fā)病率也是居高不下。在食管癌的治療手段中以手術(shù)和放化療為主,但是由于食管癌對(duì)放化療有很高的耐受性,而手術(shù)治療又增加了患者的痛苦,所以我們亟待找到一種新的有效的藥物治療食管癌的方法。
　　 苦參為中國(guó)傳統(tǒng)中藥,系豆科植物苦參的干燥根,是以苦參次堿15酮為基本結(jié)構(gòu)的化合物,主要來(lái)源于苦參根及苦豆子的提取物?？鄥⑻?/p>

2、取物中含有多種生物堿,最主要成分為氧化苦參堿和苦參堿?？鄥A對(duì)人體發(fā)揮很多藥理作用,其中最值得我們注意的是苦參堿的抗癌作用,前人研究表明苦參堿可以抑制多種腫瘤,例如hela,結(jié)腸癌,胃癌,骨肉瘤等,但是這些對(duì)苦參堿的作用機(jī)制仍然處于初級(jí)階段。
　　 Bid(BH3 interacting death agonist)是一個(gè)具有多種功能的且只含有BH3結(jié)構(gòu)域的Bcl-2家族成員。研究表明,Bid在DNA損傷修復(fù)和促進(jìn)細(xì)胞凋亡中發(fā)揮

3、雙重功能。同時(shí),Bid可以通過(guò)激活不同的信號(hào)通路對(duì)腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展起到抑制或者促進(jìn)的效果,而且研究體系的不同也可能導(dǎo)致Bid表現(xiàn)出不同的生物學(xué)功能。
　　 本論文系研究苦參堿在人食管癌細(xì)胞體內(nèi)、體外抗癌的機(jī)制。首先,苦參堿在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,對(duì)細(xì)胞存活率呈時(shí)間.劑量依賴的關(guān)系,并且通過(guò)上調(diào)蛋白P53和P21誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,使人食管癌細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期,苦參堿對(duì)凋亡通路上關(guān)鍵蛋白的調(diào)節(jié)也促進(jìn)了人食管癌細(xì)胞的凋亡。而后將食管癌

4、鱗狀細(xì)胞Eca-109對(duì)裸鼠進(jìn)行皮下成瘤實(shí)驗(yàn)并對(duì)腫瘤進(jìn)行解剖分析。實(shí)驗(yàn)證明苦參堿通過(guò)下調(diào)BCL-2/Bid蛋白,上調(diào)caspase-9蛋白的活性促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明苦參堿的促食管癌鱗狀細(xì)胞Eca-109凋亡是通過(guò)線粒體通路而并非蛋白受體通路,在苦參堿作用下蛋白Bid在凋亡過(guò)程中從細(xì)胞核向線粒體轉(zhuǎn)移。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)在裸鼠體內(nèi)苦參堿有很明顯的抑制體內(nèi)腫瘤的作用。
　　 促進(jìn)凋亡因子(AIF)激活依賴caspase

5、和非依賴caspase通路。PARP是非依賴caspase凋亡通路的重要活化因子,DNA破壞后生成PAR的聚合物。過(guò)度激活PARP啟動(dòng)了細(xì)胞核信號(hào)釋放到線粒體內(nèi)并出發(fā)了AIF的釋放,AIF隨后從線粒體中釋放并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核引起外圍染色體的沉積,產(chǎn)生大DNA碎片最終引起細(xì)胞毒性。本論文證明苦參堿可以加劇PARP的激活引起降解,并且證實(shí)苦參堿可以進(jìn)入細(xì)胞核,激活非依賴性caspase通路引起外圍染色體沉積,而后引起細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)證明細(xì)胞內(nèi)總A