邪毒內(nèi)侵致動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制及清熱解毒法的干預(yù)研究.pdf

1、1.目的本課題研究以CPN感染加高脂飼料的模式復(fù)制出邪毒內(nèi)侵致動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型；結(jié)合臨床試驗(yàn)，就其在血脂、炎癥指標(biāo)、氧化應(yīng)激、纖溶系統(tǒng)等幾個(gè)方面的影響探討邪毒內(nèi)侵致AS的機(jī)制。觀察清熱解毒法對(duì)這些指標(biāo)的作用，并觀察清熱解毒法在AS形成早期階段的干預(yù)作用，為AS的預(yù)防提供新的思路與途徑。 2.試驗(yàn)方法(1)動(dòng)物試驗(yàn)。采用高脂飼料飼喂C57BL/6J小鼠并予以肺炎衣原體滴鼻感染(每隔周接種1次，共3次，6周時(shí)間)的方式造成AS模

2、型，另設(shè)一亞組第8周時(shí)加入蛋氨酸形成高同型半胱氨酸血癥，觀察對(duì)AS的影響。予以黃連素、阿奇霉素、立普妥灌胃進(jìn)行干預(yù)，并設(shè)黃連素早期干預(yù)組(在造模開(kāi)始階段即開(kāi)始給予黃連素)，比較其作用。第16周后處死小鼠，取血清及胸主動(dòng)脈送檢。檢測(cè)指標(biāo)血清學(xué)檢查主要包括血脂(并根據(jù)血脂計(jì)算動(dòng)脈硬化指數(shù))，ELISA法檢測(cè)高敏C反應(yīng)蛋白、IL-1β、氧化型低密度脂蛋白。病理學(xué)檢查主要包括普通HE染色及計(jì)算內(nèi)膜下單核細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)，免疫組化查熱休克蛋白-70(H

3、SP-70)計(jì)算染色系數(shù)(=染色強(qiáng)度*染色面積)，電鏡檢查。 (2)臨床試驗(yàn)。選取動(dòng)脈粥樣硬化的病人共50例。按照治療組：對(duì)照組約2：1的比例隨機(jī)分為治療組(33例)和對(duì)照組(17例)。按照其病程長(zhǎng)短，分為急性期和慢性期。在西醫(yī)基礎(chǔ)治療上治療組給予三黃片治療2周。分別在治療前后觀察以下指標(biāo)。炎癥指標(biāo)：CRP、hs-CRP、hcy、WBC；其他指標(biāo)：血脂、動(dòng)脈硬化指數(shù)、纖維蛋白原、D-二聚體。 3.試驗(yàn)結(jié)果(1)動(dòng)物試驗(yàn)。

4、黃連素早期干預(yù)對(duì)于血脂及動(dòng)脈硬化指數(shù)的影響與立普妥相當(dāng)，優(yōu)于黃連素后期干預(yù)組及阿奇霉素組。對(duì)TG、HDL的作用與阿奇霉素相當(dāng)。對(duì)于TG的影響優(yōu)于其他各組。在造模的影響因素中，高脂、CPN均加重血脂指標(biāo)，而且加CPN組更高于單純高脂組。普食+CPN組與高脂+CPN組對(duì)血脂的影響作用無(wú)差異。飼料中加蛋氨酸制成高h(yuǎn)cy血癥，對(duì)于血脂及動(dòng)脈硬化指數(shù)的作用與不加者比較差異明顯。 對(duì)OX-LDL的影響，黃連素早期干預(yù)組優(yōu)于晚期干預(yù)組，但與阿

5、奇霉素、立普妥之間無(wú)差異。在單純高脂組，黃連素對(duì)OX-LDL的水平無(wú)影響。高脂+CPN與空白對(duì)照組(普食+無(wú)CPN)、普食+CPN、高脂組之間有顯著性差異。普食+CPN組與普食+CPN+hcy組之間有顯著性差異。 對(duì)IL-1β的影響，B1組的作用與阿奇霉素、立普妥相當(dāng)，優(yōu)于B2、B3組。高脂+CPN的IL-β水平高于其他，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。加用蛋氨酸飼料，IL-β水平與相應(yīng)對(duì)照組之間無(wú)差異。 對(duì)于高敏C反應(yīng)蛋白的影響，B1組

6、明顯優(yōu)于B2、B3、立普妥組，與阿奇霉素之間無(wú)差異。在單純高脂飼料組，施加黃連素(B3組)作用優(yōu)于對(duì)照單純高脂飼料組。造模方面，無(wú)論高脂、普食，CPN均促進(jìn)高敏C反應(yīng)蛋白表達(dá)，與無(wú)CPN組有顯著性差異。但高脂+CPN與普食+CPN之間無(wú)差別。加用蛋氨酸飼料，高脂+CPN組與高脂+CPN+hcy組之間hs-CRP有顯著性差異。 病理HE染色及電鏡檢查。HSP-70染色B1組與阿奇霉素組、立普妥組三組之間比較無(wú)差異，優(yōu)于B2、B3組

7、、高脂+CPN組。高脂+CPN、普食+CPN、高脂+無(wú)CPN組之間無(wú)顯著性差異。普食+CPN組與普食+CPN+hcy組及高脂+CPN組與高脂+CPN+hcy組之間無(wú)差異。對(duì)內(nèi)膜下單核細(xì)胞浸潤(rùn)的作用，B1、B2、B3、阿奇霉素組(與立普妥組相當(dāng))、高脂+CPN組之間比較，均有顯著性差異。B1組優(yōu)于其他各組。在HE染色及電鏡下觀察，各組有不同程度的內(nèi)皮細(xì)胞突起，中膜彈力纖維破壞，單核細(xì)胞浸潤(rùn)及泡沫細(xì)胞形成。電鏡下還可見(jiàn)線粒體、溶酶體等細(xì)胞器

8、的破壞。B1組、立普妥組、阿奇霉素組優(yōu)于其他組。 (2)臨床試驗(yàn)。對(duì)血脂的影響，治療組對(duì)TG的影響大于對(duì)照組。治療組與對(duì)照組的(TC-HDL)/HDL、TC/HDL有顯著性差異。組內(nèi)比較，治療后均較治療前有差異。在急性期亞組，治療組與對(duì)照組的(TC-HDL)/HDL、TC/HDL、LDL/HDL均有顯著性差異。 對(duì)FIB及D-D二聚體，治療前、后組間比較均無(wú)差異。組內(nèi)比較，治療前后有差異(治療組降低更明顯，P＜0.01)

9、，但兩組之間無(wú)差異。急性期亞組也同樣結(jié)果。 對(duì)C反應(yīng)蛋白、高敏C反應(yīng)蛋白，治療前各組之間均無(wú)差異。CRP在治療后兩組比較沒(méi)有差異，治療前后組內(nèi)比較沒(méi)有差異。hs-CRP在治療組與對(duì)照組比較有差異；治療前后組內(nèi)比較，在治療組有差異。在急性期亞組分析也如此。 對(duì)Hcy的作用治療前各組之間均無(wú)差異?？傮w比較及急性期亞組比較均提示，治療后，治療組降低hcy優(yōu)于對(duì)照組。組內(nèi)比較，各組治療前后比較均有有差異。 對(duì)WBC的影響

10、，各組在治療前后組間比較均無(wú)顯著性差異。組內(nèi)比較，治療前后有顯著性差異。 4.結(jié)論(1)動(dòng)物試驗(yàn)。高脂、CPN均加重血脂指標(biāo)及粥樣硬化指數(shù)，說(shuō)明CPN感染加重血脂異常，對(duì)AS有促進(jìn)作用。黃連素早期干預(yù)作用與立普妥相當(dāng)，優(yōu)于黃連素后期干預(yù)組及阿奇霉素組。hcy血癥通過(guò)對(duì)血脂及動(dòng)脈硬化指數(shù)的影響而對(duì)AS有促進(jìn)作用。 高脂、CPN均增加OX-LDL表達(dá)，說(shuō)明CPN感染通過(guò)氧化應(yīng)激，對(duì)AS有促進(jìn)作用。黃連素早期干預(yù)組優(yōu)于晚期干預(yù)

11、組，但與阿奇霉素、立普妥之間無(wú)差異。普食+CPN+Hcy增加OX-LDL的表達(dá)，CPN與Hcy可協(xié)同增強(qiáng)氧化應(yīng)激反應(yīng)，促進(jìn)AS發(fā)展。但在高脂飼料中無(wú)影響。 高脂、CPN均增加IL-1β表達(dá)，說(shuō)明CPN感染通過(guò)炎癥介質(zhì)，對(duì)AS有促進(jìn)作用。黃連素早期于預(yù)組優(yōu)于晚期干預(yù)組，但與阿奇霉素、立普妥之間無(wú)差異。hcy在造模中對(duì)IL-1β水平無(wú)影響。 無(wú)論高脂、普食，CPN均促進(jìn)高敏C反應(yīng)蛋白表達(dá)，B1組明顯優(yōu)于B2、B3、立普妥組，

12、與阿奇霉素之間無(wú)差異。hcy在高脂及CPN作用基礎(chǔ)上，促進(jìn)hs-CRP表達(dá)。 CPN及Hcy對(duì)于HSP-70半定量檢測(cè)無(wú)影響。黃連素早期干預(yù)作用與阿奇霉素組、立普妥組相當(dāng)，優(yōu)于B2、B3組、高脂+CPN組。高脂加CPN，加HCY均導(dǎo)致單核細(xì)胞對(duì)內(nèi)膜的浸潤(rùn)增強(qiáng)，黃連素早期干預(yù)由于其他各組。 (2)臨床試驗(yàn)。不論治療組、對(duì)照組清熱解毒法調(diào)脂治療均有效，但僅有TG與對(duì)照比較有差異；在急性期的調(diào)脂脂治療對(duì)于TG、HDL的作用治療

13、組優(yōu)于對(duì)照組。 本試驗(yàn)表明清熱解毒治療可以有效干預(yù)動(dòng)脈硬化指數(shù)，對(duì)于急性期的干預(yù)作用更強(qiáng)。 清熱解毒治療可以降低急性心腦血管疾病患者的FIB及D-D二聚體水平，抑制纖溶系統(tǒng)激活，但是這個(gè)作用與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 hs-CRP較CRP更能反映AS的炎癥反應(yīng)，清熱解毒治療能更好的干預(yù)炎癥指標(biāo)hs-CRP，尤其對(duì)于急性期患者。 清熱解毒治療有效的影響hcy，提示可以阻斷或減輕該時(shí)期的炎癥反應(yīng)，減緩AS進(jìn)程