動脈粥樣硬化斑塊破裂及藥物干預研究.pdf

1、[背景] 急性冠脈綜合征(ACS)是冠心病患者發(fā)生心臟事件的主要表現(xiàn)，其共同的病理生理基礎是冠狀動脈粥樣斑塊在多種因素作用下斑塊變得不穩(wěn)定并發(fā)生破裂，繼發(fā)血栓形成。但造成斑塊不穩(wěn)定的原因和斑塊破裂的機制目前尚不明確，研究表明斑塊內金屬基質蛋白酶(MMPs)表達增強可能與此有關。巨噬細胞是參與動脈粥樣硬化斑塊的主要炎性細胞，而且MMPs主要在巨噬細胞合成。研究顯示MMP-9是造成斑塊不穩(wěn)定的主要基質蛋白酶，是反應斑塊穩(wěn)定性的主要因素之一

2、。近來臨床研究顯示血管緊張素Ⅱ受體阻斷劑(ARB)能夠降低心血管事件發(fā)生率和患者死亡率，并且與藥物本身的降壓作用無關，提示ARB可能具有獨立于降壓作用之外的穩(wěn)定斑塊的作用。但ARB類藥物坎地沙坦是否通過減少斑塊內巨噬細胞聚集、降低MMP-9的表達從而穩(wěn)定斑塊并具有預防斑塊破裂的作用，以及替米沙坦對單核/巨噬細胞AT1、AT2受體、MMP-9表達的作用如何，目前相關的實驗研究較少。 [目的] 1.本研究在建立兔不穩(wěn)定粥樣斑

3、塊模型的基礎上，使用坎地沙坦進行干預，應用藥物誘發(fā)不穩(wěn)定斑塊破裂，觀察其預防斑塊破裂的作用，并探討其機制； 2.觀察替米沙坦對THP-1單核/巨噬細胞AT1、AT2受體、MMP-9表達的影響及聯(lián)合應用阿托伐他汀對MMP-9表達的作用，初步探討PKC抑制劑Staurosporine在MMP-9表達中的作用。 [方法] 1.應用34只新西蘭雄性大白兔，隨機分為3組：①正常對照組(n=10簡稱正常組)；②高脂加損傷組(

4、n=12簡稱模型組)；③坎地沙坦干預組(n=12簡稱干預組)。正常組給予普通飼料喂養(yǎng)，其余兩組在高脂喂養(yǎng)的基礎上應用球囊損傷腹主動脈，于實驗12周末對模型組和干預組行藥物誘發(fā)斑塊破裂，觀察坎地沙坦預防斑塊破裂的作用。 2．應用免疫組化染色，比較各組主動脈斑塊內MMP-9陽性面積、巨噬細胞含量及膠原面積比。 3．Western blot法測定主動脈斑塊內MMP-9蛋白表達水平。 4．應用流式細胞學、免疫熒光、激光共

5、聚焦方法檢測THP-1細胞AT1、AT2受體的表達。 5．應用ELISA法檢測THP-1巨噬細胞上清液MMP-9的表達。 【結果】 1．體重和血脂：經過12周的喂養(yǎng)后，各實驗組體重均較自身基礎水平顯著升高。模型組和干預組血脂較自身基礎水平顯著升高。模型組和干預組比較，TC、LDL-C無顯著性變化(P>0.05)但干預組TG較模型組顯著降低(P<0.05)。 2．病理形態(tài)學觀察：正常組主動脈內膜光滑，未見到

6、脂紋和斑塊。模型組動脈粥樣 硬化嚴重，粥樣斑塊范圍廣泛，程度重，9個主動脈血管標本中有7個標本共12處發(fā)生斑塊破裂及血栓形成，斑塊內含有大量的巨噬／泡沫細胞，膠原含量少，纖維帽很薄或不明顯，呈現(xiàn)不穩(wěn)定斑塊的特點。斑塊破裂伴血栓形成、侵蝕斑塊和鈣化斑塊均有存在。干預組動脈粥樣硬化較模型組輕，整個主動脈管壁層次尚清晰，粥樣斑塊的纖維帽較厚，斑塊內含有較少的巨噬／泡沫細胞，平滑肌細胞和膠原含量相對較多，呈穩(wěn)定斑塊的特點。干預組經藥物誘發(fā)后的

7、10個標本中有2個標本3處發(fā)生斑塊破裂，斑塊破裂數(shù)量與模型組比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。 3．免疫組化和Western blot結果：干預組斑塊內MMP-9陽性面積比較模型組顯著降 低；干預組斑塊內巨噬細胞陽性面積比較模型組顯著降低；干預組斑塊內膠原陽 性面積比較模型組顯著增加。干預組MMP-9蛋白表達水平較模型組明顯降低。 4．流式細胞學、免疫熒光及激光共聚焦檢測替米沙坦顯著降低THP-1細胞AT1受體 的

8、表達，而對AT2受體無明顯影響。 5．替米沙坦顯著降低Ang Ⅱ誘導的THP-1巨噬細胞MMP-9表達并呈濃度依賴性， 替米沙坦聯(lián)合阿托伐他汀可進一步降低THP-1巨噬細胞MMP-9的表達。 6．AT2受體阻斷劑PD123319對THP-1巨噬細胞MMP-9的表達無明顯影響。 7．PKC抑制劑Staurosporine顯著減低THP-1巨噬細胞MMP-9的表達。 [結論] 1.本研究顯示，在動物