檸檬精油防齲作用的動物實驗研究.pdf

1、目的:天然藥物防齲是齲病預(yù)防和治療的重要策略，目前已經(jīng)成為齲病研究的焦點之一。前期研究證實，LEO(Lemon essential oil，LEO)對常見口腔致齲菌有抑制作用，并且在低于最小抑菌濃度（Minimal inhibitory concentration，MIC）時仍然具有抑制變異鏈球菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌(Streptococcus sobrinus，S.sobrinus)等致齲菌早期粘附、產(chǎn)酸、產(chǎn)胞外多糖等致齲毒力因子的作用。本研

2、究在前期工作的基礎(chǔ)上，建立大鼠齲病模型，對LEO及其主要有效成分檸檬烯(Limonene，LIM)的體內(nèi)防齲效能進(jìn)行客觀評價，為進(jìn)一步的臨床研究提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.水蒸氣蒸餾法提取精油，氣相-色譜-質(zhì)譜-數(shù)據(jù)庫聯(lián)用系統(tǒng)分析其成分。
　　 2.紙片擴(kuò)散法測定LEO、LIM對S.sobrinus的MIC。
　　 3.LEO及LIM防齲作用的動物實驗研究
　　 (1)飼喂Keyes200

3、0#致齲飼料建立大鼠齲病動物模型:
　　 (2)實驗分組:陽性對照組:洗必泰溶液(Chlorhexidine，CHX，0.12％);陰性對照組:蒸餾水(H2O);實驗組: LEO乳濁液（LEO，2.25mg/mL即MIC/2）;LIM乳濁液（LIM，10.50mg/mL即MIC/2）。
　　 (3)實驗過程:
　　 在大鼠接種S.sobrinus第二天，取大鼠唾液，稀釋涂平板，連續(xù)三天(28天-30天)檢測S.s

4、obrinus定植情況。鼠齡31天開始，用不同藥物對大鼠進(jìn)行口腔處理，連續(xù)5周，每天2次。64天時，采集大鼠唾液，稀釋涂平板，菌落計數(shù)，隨后，乙醚麻醉處死大鼠，制備牙頜骨標(biāo)本。
　　 (4)觀察指標(biāo):以下檢測值作為衡量各組防齲效果的指標(biāo)
　　 大鼠唾液中總菌落數(shù)、S.sobrinus菌落數(shù);S.sobrinus水平(S.sobrinus菌落數(shù)/總菌落數(shù)*100％);Keyes記分;激光齲齒診斷儀探測熒光值。
　　

5、 結(jié)果:
　　 1.LEO的提取及成分分析:
　　 LEO的氣相色譜-質(zhì)譜總離子流色譜圖(TIC)中，共檢測出100余個色譜峰，鑒定了其中的40個色譜峰，其含量占揮發(fā)油總量的93.95％。主要成分是LIM及其衍生物。
　　 2.LEO及LIM對S.sobrinus的MIC:LEO對S.sobrinus的MIC為4.50 mg/mL;LIM對S.sobrinus的MIC為21.00 mg/mL。
　　 3.

6、大鼠唾液中細(xì)菌水平:
　　 (1)唾液中S.sobrinus菌落數(shù):
　　 CHX組＜LEO組＜LIM組＜H2O組，其中，CHX組與實驗組及H2O組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，H2O組與其它各組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，LEO與LIM組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 (2)唾液中總菌落數(shù)及S.sobrinus菌落數(shù)/總菌落數(shù):
　　 CHX組＜LEO組＜LIM組＜H2

7、O組，其中，CHX組與實驗組及H2O組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，其余各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4.大鼠磨牙Keyes齲齒記分:
　　 (1)大鼠磨牙平滑面齲Keyes記分:
　　 CHX組＜LEO組＜LIM組＜H2O組，其中，LEO組與CHX組、LIM組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，CHX組與LIM組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，H2O組與其它各組之間差異有統(tǒng)計

8、學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (2)大鼠磨牙窩溝齲中Keyes記分:
　　 窩溝E級和Dx級齲損Keyes記分中，CHX組＜LEO組＜LIM組＜H2O組，其中，LEO組與CHX組、LIM組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，CHX組與LIM組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，H2O組與其它各組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);
　　 窩溝Ds級和Dm級齲損Keyes記分中，CHX組＜LEO組＜LIM組

9、＜H2O組，其中，CHX組與實驗組及H2O組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，H2O組與其它各組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，LEO與LIM組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 5.激光齲齒診斷儀探測熒光值:
　　 激光齲齒診斷儀探測熒光值，CHX組＜LEO組＜LIM組＜H2O組，其中，CHX組與實驗組及H2O組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，H2O組與其它各組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0

10、.05)，LEO與LIM組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.水蒸氣蒸餾法提取獲得的LEO，主要成分以烯類化合物為主，占總含量78.85％，主要有:LIM(48.00％)及其衍生物β-蒎烯(17.00％)等。
　　 2.LEO、LIM對口腔主要致齲菌S.sobrinus有生長抑制作用。
　　 3.在大鼠齲病模型中，1/2MIC的LEO、1/2MIC的LIM并不影響大鼠口腔微生態(tài)