蜈蚣有效部位抗心肌缺血作用及其NO機(jī)制研究.pdf

1、蜈蚣屬于蟲類中藥材，具有鎮(zhèn)靜熄風(fēng)、通絡(luò)止痛之功效，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“其走竄之力最速，內(nèi)而臟腑外而經(jīng)絡(luò)，凡氣血凝聚之處皆能開之”。蜈蚣具有改善微循環(huán)、消除血栓、鎮(zhèn)靜止痛、抗炎、降壓等作用。以蜈蚣為主要藥味的復(fù)方在臨床應(yīng)用非常廣泛，其復(fù)方制劑通心絡(luò)等已證明對(duì)心肌缺血有顯著療效，能夠改善心功能。但單味藥蜈蚣有效部位抗心肌缺血的作用及其相關(guān)機(jī)制并不十分清楚，本文探討通心絡(luò)組成中的單味藥蜈蚣有效部位抗心肌缺血的作用，為臨床使用蜈蚣治療心臟病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)

2、。 一、建立精氨酸加壓素誘導(dǎo)的大鼠冠脈痙攣心肌缺血模型 SPF級(jí)Sprague Dawley雄性大鼠，200～250克，32只，中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為四組：對(duì)照組、AVP-1組(0.2 IU/kg)、AVP—2組(0.5 IU/kg)、AVP—3組(1.0 IU/kg)，分籠飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前禁食12h。予腹腔注射20％烏拉坦麻醉(6 ml/kg)，其中AVP-1組頸靜脈注射AVP0.2 IU/kg，AVP—2組

3、頸靜脈注射AVP0.5 IU/kg，AVP—3組頸靜脈注射AVP1.0 IU/kg，對(duì)照組頸靜脈注射1 ml/kg生理鹽水，測(cè)量各組注射后10min內(nèi)心電圖ST段、S波、T波的變化幅度。2小時(shí)后各組大鼠心臟采血處死，取心臟作冰凍切片，觀察病理改變。選取心肌缺血造模成功的AVP劑量。結(jié)果表明，AVP造模的最佳劑量是0.5 IU/kg。 二、蜈蚣有效部位抗心肌缺血的量效—時(shí)效觀察 1)量效觀察：雄性SD大鼠，分成模型組、蜈蚣

4、有效部位各不同劑量組(0.15625、0.3125、0.625、1.25g/kg)，腹腔注射給藥3d。各組在最后1d腹腔注射給藥30min后頸靜脈注射精氨酸加壓素(0.5 IU/kg)，記錄心電圖觀察ST段、S波、T波的幅度變化。結(jié)果表明，蜈蚣有效部位的最佳劑量為0.625g/kg。 2)時(shí)效觀察：雄性SD大鼠，分成模型組、蜈蚣有效部位各不同給藥時(shí)間組(1d、3d、5d)，給予劑量0.625g/kg。各組在最后1d腹腔注射給藥3

5、0min后頸靜脈注射精氨酸加壓素(0.5 IU/kg)，記錄心電圖觀察ST段、S波、T波的幅度變化。結(jié)果表明，蜈蚣有效部位的最佳給藥時(shí)間是3d。 3)由以上結(jié)果得出：蜈蚣有效部位0.625g/kg腹腔注射3天可以得到最佳的抗AVP誘導(dǎo)的心肌缺血的作用。 三、蜈蚣有效部位抗心肌缺血的效應(yīng)研究 雄性SD大鼠，分為對(duì)照組、模型組、蜈蚣有效部位組、一氧化氮合酶阻斷劑組(以下稱L—NAME組)。按上述蜈蚣有效部位的劑量和時(shí)

6、間給予用藥(0.625g/kg，3d)。最后1d腹腔注射給藥30min后，腹腔注射20％烏拉坦麻醉(6ml/kg)，予頸靜脈注射AVP，其中L—NAME組在注射AVP前20分鐘注射L—NAME(10mg/kg)。觀察各組血流動(dòng)力學(xué)心功能指標(biāo)。2小時(shí)后心臟采血，心臟組織用4℃生理鹽水沈干凈，吸水紙吸干置于—80℃冰箱備勻漿用。檢測(cè)血漿NO含量、心肌組織SOD活性、MDA含量及血清心肌酶CK、LDH變化。結(jié)果表明，蜈蚣有效部位能提高LVSP

7、，降低MAP，有效改善心臟收縮和舒張功能，升高血漿中NO的含量，增加心肌組織中SOD活力，降低心肌組織中MDA含量，使心肌酶CK、LDH活性降低。而L—NAME組能夠抑制蜈蚣有效部位的抗心肌缺血的作用，與模型組效果接近。 四、蜈蚣有效部位抗心肌缺血的NO—NOS—NOSmRNA機(jī)制探討 將第三部分各組大鼠心肌組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察eNOS蛋白的表達(dá)，進(jìn)行RT—PCR實(shí)驗(yàn)觀察心肌組織eNOSmRNA轉(zhuǎn)錄情況。

8、 1)心肌組織eNOS蛋白的表達(dá)：結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，模型組心肌中eNOS的陽(yáng)性細(xì)胞面積有所下降，蜈蚣有效部位可明顯升高心肌中eNOS的陽(yáng)性細(xì)胞。提示蜈蚣有效部位可以升高心肌組織中的eNOS蛋白表達(dá)。 2)心肌組織eNOSmRNA轉(zhuǎn)錄：結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，模型組的心肌細(xì)胞中eNOS的mRNA轉(zhuǎn)錄明顯下降，蜈蚣有效部位可升高心肌細(xì)胞中eNOSmRNA的轉(zhuǎn)錄。提示蜈蚣有效部位可以增強(qiáng)eNOS的mRNA轉(zhuǎn)錄。 結(jié)論：

9、 1)通過觀察大鼠頸靜脈注射不同劑量AVP后心電圖的變化，以及心肌組織HE染色病理改變，探討建立AVP誘導(dǎo)大鼠冠脈痙攣心肌缺血的模型。AVP造模最佳劑量是0.5 IU/kg。 2)探討蜈蚣有效部位抗AVP誘導(dǎo)的心肌缺血的最佳劑量和作用時(shí)間。最佳劑量是0.625g/kg，最佳作用時(shí)間是3d。 3)蜈蚣有效部位能明顯對(duì)抗AVP所致的心肌缺血損傷，能夠提高LVSP、+dp/dtmax，降低MAP、LVEDP、—dp/dt

10、max，改善心臟收縮和舒張功能，升高血漿NO含量，提高心肌組織SOD活性，降低心肌組織MDA含量，降低血清CK、LDH活性。病理形態(tài)學(xué)表明蜈蚣有效部位能夠改善心肌缺血導(dǎo)致的心肌細(xì)胞腫脹，減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。上述結(jié)果表明，蜈蚣有效部位對(duì)AVP所致的大鼠心肌缺血具有顯著的防治作用。 4)蜈蚣有效部位可以通過升高eNOSmRNA的表達(dá)水平，升高eNOS蛋白表達(dá)而增加NO的生成，實(shí)現(xiàn)抗心肌缺血的作用。 5)阻斷實(shí)驗(yàn)表明一氧化氮合酶