三七有效部位藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究;紅花中抗腦缺血活性成分質(zhì)譜裂解行為及分布研究.pdf

1、本論文包括三七有效部位藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究和紅花中抗腦缺血活性成分質(zhì)譜裂解行為及體內(nèi)分布研究兩個部分。 三七為五加科植物三七Panax notoginseng(Burk．)F．H．Chen的干燥根。具有散瘀止血，消腫定痛的功效。大量藥物化學(xué)及藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明：皂苷類成分為三七的主要活性成分之一，其皂苷類型主要為達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜(人參皂苷)。目前國內(nèi)外對該類成分的研究報(bào)道較多，包括質(zhì)譜裂解行為、在線鑒定、定量分析方法及代謝研究等，其

2、研究重點(diǎn)主要針對常量皂苷類成分。由于受常規(guī)分離方法所限，對其微量成分的信息知之甚少，然而中藥是一個復(fù)雜體系，即使僅由皂苷類成分組成的有效部位，除常量成分外尚有很多微量甚至痕量成分客觀存在，因此有必要對這些微量成分進(jìn)行鑒定。本論文即主要針對三七有效部位中微量皂苷類成分進(jìn)行研究，以進(jìn)一步闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。 基于以上研究目的，本論文首先對12個皂苷對照品進(jìn)行了ESI—MSn和HPLC/ESI_MSn裂解行為研究，總結(jié)了特征性碎片離子

3、及其強(qiáng)度與結(jié)構(gòu)的關(guān)系，并深入探討了其裂解機(jī)理與結(jié)構(gòu)間的內(nèi)在聯(lián)系，建立了可用于解析皂苷糖鏈、苷元及二者連接信息的在線鑒定策略。另外，在對三七有效部位中常量皂苷類成分含量測定的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)其量大成分對微量成分的檢出存在較大干擾，據(jù)此提出利用色譜方法除去有效部位中量大成分，從而在現(xiàn)有條件下大大提高了微量成分的檢出靈敏度。最后，運(yùn)用以上總結(jié)的皂苷類成分裂解規(guī)律和在線鑒定策略，對富集微量皂苷類成分的部位進(jìn)行HPLC/HRMS、HPLC/DAD/E

4、SI—MSn測定，鑒定或推測了151個常量及微量皂苷類成分的結(jié)構(gòu)，其中56個為新化合物。 上述研究為快速、有效識別并鑒定植物提取物中的微量成分提供了有益的借鑒，同時為進(jìn)一步開展三七指紋圖譜、闡明三七有效部位中藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其代謝研究奠定基礎(chǔ)。 紅花為菊科(Compositae)植物Carthamus tinctorius L．的干燥管狀花。具有活血通經(jīng)、散瘀止痛、降低膽固醇、降血壓等功效。醌型查耳酮類化合物為其發(fā)揮活血化

5、淤功效的主要活性成分，這類化合物屬色素類成分極性較大，分離純化過程比較困難，因此有必要對其UV、ESI—MS、ESI—MSn等譜學(xué)特征進(jìn)行研究，總結(jié)出可用于該類成分在線結(jié)構(gòu)鑒定的譜學(xué)規(guī)律。 本論文利用ESI—MSn及HPLC/DAD/ESI—MSn等方法，研究了紅花中醌型查耳酮類成分質(zhì)譜裂解行為，通過分析該類化合物的UV吸收特征，正負(fù)離子模式下所表現(xiàn)的不同裂解特征，并以HPLC—HRMSn數(shù)據(jù)對可能的裂解機(jī)制進(jìn)行驗(yàn)證，總結(jié)了該類

6、化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律。為快速、有效識別并鑒定植物提取物中醌型查耳酮類化合物提供分析方法，并為進(jìn)一步開展該類化合物代謝研究奠定基礎(chǔ)。 羥基紅花黃色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)是從紅花中分離得到的醌型查耳酮類化合物，該化合物具有較強(qiáng)的抗腦缺血活性。然而對于HSYA抗腦缺血可能的作用部位，是否可透過血腦屏障而發(fā)揮作用等方面的研究目前報(bào)道較少。本論文在對紅花中醌型查耳酮類成分質(zhì)譜裂解行為研究的基礎(chǔ)上，

7、開展了紅花中抗腦缺血活性成分HSYA在血漿、腦組織及細(xì)胞中的分布研究。探討了HSYA作為抗腦缺血藥物，在不同組別大鼠(正常組與腦缺血模型組)、不同時間點(diǎn)(3、6、12、24h)、不同給藥方式(單次給藥與多次給藥)及在不同部位腦組織(腦干、皮層、海馬區(qū)、小腦)中的分布特征。研究表明，HSYA作為極性小分子化合物可以透過大鼠血腦屏障；其在不同組別動物、不同給藥方式、不同部位腦組織及不同時間點(diǎn)的分布均存在顯著性差異。該研究結(jié)果可為進(jìn)一步探索H