苦參種子抗菌活性物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、近年來，感染性疾病的發(fā)病率越來越高，尤其是新型病毒以及多藥耐藥菌的出現(xiàn)，對人們的身心健康造成了不可磨滅的影響。同時(shí)，作為殺菌，抑菌首選藥的抗生素，雖然經(jīng)過不斷地創(chuàng)新，卻還是不能改變耐藥性細(xì)菌層出不窮的局面，究其原因是抗生素類藥物或化學(xué)合成類藥物是誘發(fā)細(xì)菌產(chǎn)生保護(hù)機(jī)制的罪魁禍?zhǔn)住Ｒ蚨?，尋找新型抗菌藥物迫在眉睫。中藥由于具有不易產(chǎn)生細(xì)菌耐藥性的特殊抗菌機(jī)理，成為近年來人們研究抗菌藥物的熱點(diǎn)。因?yàn)橹兴幉目鄥⒏鶖?shù)量稀少，且不可持續(xù)利用，本課題選

2、用能可持續(xù)利用的苦參種子作為研究對象。將苦參種子與苦參根的化學(xué)成分進(jìn)行對比，同時(shí)，結(jié)合抗菌效果，篩選藥用抗菌成分的提取方法與提取溶劑，并將藥用活性部位進(jìn)一步分離純化得到單體化合物，為深入研究抗菌活性成分的構(gòu)效關(guān)系提供科學(xué)依據(jù)。
　　具體研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　1.分別以石油醚，氯仿，乙酸乙酯，無水乙醇，80％乙醇為溶劑，采用超聲提取，加壓提取，回流提取，微波提取等方法提取苦參種子中的抑菌活性成分，并以抑菌強(qiáng)度為實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，從

3、中選擇提取苦參種子抗菌活性成分的最佳提取溶劑與提取方法。結(jié)果表明：苦參種子的石油醚、氯仿、乙酸乙酯的提取液均無抑菌作用，而醇提物的抑菌作用由小到大的順序?yàn)椋簾o水乙醇提取物＜80%乙醇提取物；四種方法提取物的抗菌性由強(qiáng)到弱的順序依次為：超聲提取＞加壓提?。疚⒉ㄌ崛。净亓魈崛?。
　　2.采用上述四種提取方法提取苦參藥材中的抗菌活性成分，結(jié)合薄層層析以及抑菌實(shí)驗(yàn)，將苦參根與苦參種子成分進(jìn)行初步的對比。結(jié)果表明：薄層圖譜顯示苦參種子與苦參

4、根在成分上存在明顯的差異；抗菌實(shí)驗(yàn)證明，苦參種子的抑菌活性成分極性較大，而苦參根的抑菌活性成分極性相對較小?？鄥⒏c種子均對革蘭氏陽性菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑菌性，且苦參種子80%乙醇提取液的最小抑菌濃度大約在5mg/mL-10mg/mL之間。
　　3.將苦參種子與苦參根80%的醇提物按極性順序依次萃取為石油醚層，乙酸乙酯層和正丁醇層。采用化學(xué)鑒別、薄層層析、HPLC等方法對上述三層物質(zhì)的成分及活性進(jìn)行分析?；瘜W(xué)鑒別的方法表明，苦參根與苦

5、參種子所含成分有較大的差別，苦參種子醇提物所含的酚類成分，萜類成分，有機(jī)酸類成分，生物堿類成分以及黃酮類成分多偏中等極性及大極性。薄層研究表明，加壓提取和超聲提取這兩種方法提取的苦參種子化學(xué)成分基本一致，但與苦參根成分差別較大?？鄥⒎N子醇提物基本不含小極性的生物堿，而大極性的生物堿與苦參根相差也較大。HPLC分析表明，苦參種子醇提物在乙酸乙酯層中所含的成分極性相對較小，苦參根所含的成分極性范圍較廣?？咕钚詫?shí)驗(yàn)表明，采用超聲提取和加壓提

6、取均不影響苦參種子抑菌活性成分的提取，并且二者提取的乙酸乙酯層均具有一定的抑菌效果。
　　4.苦參種子80%醇提物的乙酸乙酯層為研究對象，綜合運(yùn)用硅膠柱層析，凝膠柱層層析以及高效制備液相色譜等手段進(jìn)行一系列的分離純化，共分離得到5個(gè)單體化合物，采用紫外，質(zhì)譜，核磁等方法鑒定為：（1）β-谷甾醇；（2）5,7-二輕基-4’甲氧基異黃酮(鷹嘴豆芽素A)；（3）5,7,3’-三羥基-4’-甲氧基異黃酮（紅車軸草素，首次在苦參中發(fā)現(xiàn)）；（

7、4）7,4’-二羥基異黃酮（大豆素）；（5）3’,4’-二羥基-7-甲氧基異黃酮（未知化合物，含量較高）。油脂類成分通過GC-MS檢測出48個(gè)組分，其中亞油酸為其主要成分，含量可達(dá)32.76%，其余低極性成分含量均較低，是否為新化合物有待進(jìn)一步研究。
　　綜上所述，作為能夠可持續(xù)利用的藥材，本課題初步研究了苦參種子的抗菌活性成分，明確了苦參種子與苦參根之間的差異，分離純化出苦參種子抗菌活性單體化合物，以期為歸納、總結(jié)抗菌活性與結(jié)構(gòu)