BMSCs移植聯(lián)合VEGF對大鼠脊髓損傷后神經(jīng)細胞凋亡和神經(jīng)功能恢復(fù)的研究.pdf

1、目的：探索骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）移植聯(lián)合鞘內(nèi)注射血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）對SD大鼠急性脊髓損傷(SCI)后神經(jīng)細胞凋亡和神經(jīng)功能恢復(fù)的影響。
　　方法：通過密度梯度離心的方法制備大鼠BMSCs。采用雄性Sprapue-dawley（SD）大鼠140只，重量200~250g。利用動脈瘤夾鉗夾大鼠胸10脊髓建立SD大鼠T10脊髓損傷模型。隨機分成手術(shù)對照組（A組），BMSCs移植組（B組），VEGF組（C組），BMSCs移

2、植聯(lián)合VEGF組（D組），每組35只。從每組中隨機取5只，在術(shù)前1d，術(shù)后1d、3d、7d、14d、21d、28d進行BBB運動功能的雙盲評分檢測，然后取出傷段脊髓組織，通過免疫組織化學(xué)染色的方法檢測神經(jīng)中絲蛋白NF200的變化。每組動物再按照觀察時間點隨機分成術(shù)后4h組、8h組、1d組、3d組、7d組、14d組，每個時間點5只，在每個時間點取出傷段脊髓組織，用RT-PCR法檢測bax和bcl-2基因表達的情況。然后把所獲取的數(shù)據(jù)資料通

3、過組內(nèi)方差分析和組間均數(shù)LSD-t檢驗的方法進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：（1）、采用密度梯度離心的方法成功提取了BMSCs，它可以在體外進行傳代、培養(yǎng)、擴增，經(jīng)流式細胞儀檢測后確定所培養(yǎng)的細胞為BMSCs。（2）、制作SD大鼠SCI模型后1d，所有大鼠出現(xiàn)雙側(cè)后肢運動功能障礙，BBB評分均小于1分，各組間無統(tǒng)計學(xué)差異；術(shù)后3d、1w等時間點各組大鼠間BBB評分無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)；在術(shù)后2w、3w、4w的各時間點，B、

4、C、D組的BBB評分要明顯高于A組，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05），D組的BBB評分要比B、C組高，具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；B、C兩組之間BBB評分無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。（3）、脊髓損傷后，各組大鼠bax和bcl-2基因的轉(zhuǎn)錄表達均上升，但基因bax表達量更高；相比于A組，B組、C組的bc l-2基因表達量更高（P<0.05），bax基因表達量更低（P<0.05）；B組、C組與D組相比，bcl-2基因表達量降低

5、（P<0.05），而bax基因表達量升高（P<0.05）。（4）、NF免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明，D組平均灰度值明顯低于A、B、C三組，具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：（1）BMSCs和VEGF能夠促進脊髓損傷后NF的表達，加快神經(jīng)功能恢復(fù)；（2）BMSCs、VEGF對凋亡基因bax、bcl-2的表達具有調(diào)節(jié)作用，從而減少神經(jīng)細胞凋亡，促進脊髓功能恢復(fù)；（3）BMSCs移植聯(lián)合應(yīng)用VEGF對抑制神經(jīng)細胞凋亡，保護脊髓