低強(qiáng)度超聲聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠脊髓損傷功能恢復(fù)的影響.pdf

1、第一部分 新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng) 目的:神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells，NSCs)是近年來(lái)神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。NSCs是具有自我更新能力和多向分化潛能的細(xì)胞，可分化為神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞，在胚胎及成年哺乳類動(dòng)物中廣泛存在。NSCs的分離培養(yǎng)是其基礎(chǔ)和應(yīng)用研究的前提，本部分目的在于獲得新生大鼠NSCs，為深入研究其增殖分化及在SCI中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法:從新生2

2、4h內(nèi)大鼠端腦及中腦部位分離NSCs，采用體外無(wú)血清懸浮培養(yǎng)，以獲得能在體外長(zhǎng)期生存的NSCs；通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)NSCs標(biāo)記物nestin表達(dá)及分化為神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的能力。 結(jié)果:獲得的NSCs能在體外長(zhǎng)期生存，具有很強(qiáng)的增殖能力、自我更新能力，表達(dá)nestin，具有多向分化能力，能分化為神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞。 結(jié)論;成功地從新生大鼠端腦和中腦中分離得到了能在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)的NSCs，培養(yǎng)的NSCs表達(dá)nestin，有自

3、我更新、多向分化的特點(diǎn)，通過(guò)培養(yǎng)細(xì)胞大量擴(kuò)增。 第二部分 低強(qiáng)度超聲聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠脊髓損傷功能恢復(fù)的實(shí)驗(yàn) 目的:脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)的修復(fù)一直以來(lái)是神經(jīng)科學(xué)研究領(lǐng)域的一大難題，由于脊髓組織自身的修復(fù)能力極其有限，激活的內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞再生不足以修復(fù)損傷的脊髓組織，因此，利用外源性細(xì)胞移植來(lái)替代丟失的神經(jīng)細(xì)胞修復(fù)受損的脊髓、重建神經(jīng)通路一直以來(lái)是人們研究的熱點(diǎn)。神經(jīng)干細(xì)

4、胞因其來(lái)源于神經(jīng)組織、具有自我更新能力、具有分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的潛能、能遷移到達(dá)損傷或疾病部位等特點(diǎn)，成為脊髓損傷細(xì)胞替代療法的理想移植材料。近年來(lái)，隨著對(duì)低強(qiáng)度超聲生物學(xué)效應(yīng)的研究發(fā)現(xiàn)，低強(qiáng)度超聲具有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、幫助實(shí)驗(yàn)性周圍神經(jīng)損傷的一定作用。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察源于中腦端腦的神經(jīng)干細(xì)胞移植聯(lián)合應(yīng)用超聲對(duì)脊髓損傷功能恢復(fù)的作用。 方法: 40只成年SD大鼠隨機(jī)分為正常A組對(duì)照組、B組損傷組(SCI組)、C組單純移植NSC

5、s組(NSCs)和D組NSCs移植聯(lián)合應(yīng)用超聲組(NSCs+LIU)，每組10只。除A組外，其余3組制作T8平面脊髓全橫斷模型，將含有NSCs懸液的明膠海綿植入C組和D組橫斷損傷脊髓處，B組在損傷處移植含細(xì)胞培養(yǎng)液的明膠海綿，D組同時(shí)應(yīng)用超聲治療。2月后，實(shí)驗(yàn)各組采用BBB評(píng)分、皮層體感誘發(fā)電位(CSEP)、電鏡和免疫組織化學(xué)觀察大鼠運(yùn)動(dòng)傳導(dǎo)功能恢復(fù)的作用。 結(jié)果:對(duì)照組BBB評(píng)分21分。術(shù)后2月BBB評(píng)分，B組(2.5±1.0

6、5)分，C組(5.0±0.89)分，D組(6.8±0.75)分。C、D組評(píng)分明顯高于B組，以D組最高(P＜0.05)。但未達(dá)到正常。脊髓損傷后，B、C、D組的CSEP波消失，術(shù)后2個(gè)月C組D組的波形有所恢復(fù)，但潛伏期延長(zhǎng)，波幅幅度降低，而B組波形仍完全消失。電鏡顯示，C組、D組損傷區(qū)見再生髓鞘、軸突及神經(jīng)元。而B組仍見明顯的髓鞘細(xì)胞變性及瘢痕組織。免疫組織化學(xué)顯示D組移植的NSCs分化為神經(jīng)元數(shù)量較多，分化為膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量較少，且形成的