神經(jīng)干細胞移植治療基底節(jié)腦出血的實驗研究.pdf

1、中南大學博士學位論文神經(jīng)干細胞移植治療基底節(jié)腦出血的實驗研究姓名：高俊瑋申請學位級別：博士專業(yè)：外科學（神經(jīng)外科）指導(dǎo)教師：方加勝20060301博士學位論文中文摘要面的進展，體外培養(yǎng)技術(shù)已基本成熟。神經(jīng)干細胞移植做為一種有前景的治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變的手段正受到越來越多的重視。本課題應(yīng)用比較成熟的神經(jīng)干細胞的分離、培養(yǎng)手段，在體外研究神經(jīng)干細胞的增殖分化特點。采用免疫熒光標記技術(shù)觀察腦出血后內(nèi)源性神經(jīng)干細胞的分布、遷移和分化，同時應(yīng)用R

2、T—PCR方法檢測腦出血后神經(jīng)干細胞特異性標志物NestinmRNA在不同時間點的表達，間接為神經(jīng)干細胞移植治療腦出血尋找適宜的移植時間窗。應(yīng)用體外分離培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞移植治療基底節(jié)腦出血模型，從基因水平、形態(tài)結(jié)構(gòu)及功能恢復(fù)三個方面來研究神經(jīng)干細胞移植對基底節(jié)腦出血的治療作用，為腦出血的治療探討新的途徑，為臨床應(yīng)用研究提供實驗基礎(chǔ)。研究包括以下三個部分：一、神經(jīng)干細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定及體外長期培養(yǎng)目的利用無血清培養(yǎng)技術(shù)和細胞克隆培養(yǎng)技

3、術(shù)從大鼠胚胎腦組織中分離出神經(jīng)干細胞，并在體外進行傳代培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化，建立神經(jīng)干細胞體外分離、培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化鑒定體系。方法對培養(yǎng)的不同代數(shù)的神經(jīng)干細胞分別進行誘導(dǎo)分化實驗，采用免疫熒光細胞化學染色方法觀察不同代數(shù)神經(jīng)干細胞克隆球中Nestin、NeuN、GFAP陽性細胞的比例，鑒定并定量研究培養(yǎng)的原代和傳代的細胞類型。同時進行神經(jīng)干細胞長期傳代培養(yǎng)和凍存復(fù)蘇的研究。結(jié)果隨著傳代次數(shù)增加，克隆球中Nestin陽性細胞的比例無明顯變化，不同