骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞移植治療帕金森病大鼠的療效比較研究.pdf

1、目的：帕金森病(PD)是一種多發(fā)于中老年人的慢性神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，以中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元變性壞死和紋狀體區(qū)多巴胺(DA)水平減少為主要病理特點，其紋狀體中的神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺和乙酰膽堿之間的相互拮抗作用失調(diào)，而導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)疾病。臨床上以進(jìn)行性加重的運動緩慢、肌強(qiáng)直、靜止性震顫、姿勢步態(tài)異常等為特征。如今，PD已成為危害老年人健康的位居第二的神經(jīng)變性性疾病(ND)，60歲以上人群中患病率為1000/10萬，并隨年齡增長而增高，嚴(yán)重威脅著

2、老年人的身體健康和生活質(zhì)量，甚至造成殘障。傳統(tǒng)的藥物治療包括多巴胺替代治療、抗膽堿能制劑、單胺氧化酶抑制劑、金剛烷胺及多巴胺受體激動劑等，這些藥物只能暫時減輕或緩解癥狀，而不能阻止PD的進(jìn)程，長期應(yīng)用療效下降，還會出現(xiàn)開-關(guān)現(xiàn)象、劑末現(xiàn)象及運動障礙等。外科治療以蒼白球和丘腦毀損術(shù)為主要方法，但手術(shù)創(chuàng)傷大，且使用對象局限。另外，深部電刺激(DBS)治療PD雖然有較好的療效，尤其是對丘腦底核的刺激要優(yōu)于對蒼白球的刺激，但是其遠(yuǎn)期效果不確切，

3、且費用昂貴。由于PD主要是由黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元變性導(dǎo)致紋狀體內(nèi)多巴胺水平下降所致，因此在黑質(zhì)-紋狀體系統(tǒng)內(nèi)移植能夠分泌多巴胺的細(xì)胞，恢復(fù)多巴胺的神經(jīng)環(huán)路，即成為一種針對病因的理想治療方法。神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)和骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的發(fā)現(xiàn)和研究的不斷深入，為細(xì)胞移植治療提供了新的思路。近年，對應(yīng)用NSCs和BMSCs移植治療帕金森病的研究有很多，但少有將兩種細(xì)胞進(jìn)行比較研究的。在本研究中，采用同種異體來源的中腦NSCs和BMSCs

4、在體外擴(kuò)增培養(yǎng)后，立體定向移植到PD大鼠的紋狀體，觀察PD大鼠的行為學(xué)變化以及組織形態(tài)學(xué)的改變，探討其在腦內(nèi)的存活和分化及比較NSCS和BMSCs移植治療PD大鼠模型的療效。 方法： ①動物：封閉群清潔級成年雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠和新生SD大鼠均由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，實驗過程中對動物的處置符合動物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。 ②實驗方法：成年SD大鼠麻醉后，借助腦立體定位儀注射6-羥基多巴胺(6-

5、OHDA)建立右側(cè)PD模型，隨機(jī)數(shù)字表法分為NSCs組14只、BMSCs組10只、空白對照組10只，選取右側(cè)紋狀體2個坐標(biāo)點(in mm：A+0.6；R+4.0；V-5.0)、(in mm：A-0.7；R+3.0；V-5.0)，前兩組每個坐標(biāo)點分別注入經(jīng)Brd-U標(biāo)記的NSCs懸液、BMSCs懸液5μL，共移植約1×106個細(xì)胞，空白對照組注射等量磷酸鹽緩沖液。 ③實驗評估：細(xì)胞移植后連續(xù)8周觀察阿樸嗎啡(APO)誘導(dǎo)的大鼠旋轉(zhuǎn)

6、行為的變化，對腦紋狀體區(qū)連續(xù)冠狀石蠟切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)熒光染色鑒定，檢測雙標(biāo)細(xì)胞Brd-U/nestin，Brd-U/GFAP，Brd-U/MAP-2，Brd-U/TH及黑質(zhì)區(qū)酪氨酸羥化酶(TH)陽性細(xì)胞數(shù)。 結(jié)果： ①PD大鼠行為學(xué)改變：與移植前比較，APO誘導(dǎo)2-8周NSCs組和BMSCs組PD大鼠的旋轉(zhuǎn)次數(shù)均明顯減少，這兩組轉(zhuǎn)數(shù)分別從移植前的(13.9±4.8)r/min和(10.5±3.1)r/min降到治療后

7、第8周的(6.2±3.2)r/min和(4.6±3.4)r/min，移植前后數(shù)據(jù)相比，差異都有統(tǒng)計學(xué)意義；空白對照組移植前旋轉(zhuǎn)次數(shù)為(13.3±3.6)r/min，移植后第8周旋轉(zhuǎn)次數(shù)為(11.4±2.6)r/min，移植前后數(shù)據(jù)無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與空白對照組比較，APO誘導(dǎo)2-8周NSCs組和BMSCs組PD大鼠的旋轉(zhuǎn)次數(shù)均明顯減少，此兩組間各時間點比較差異無顯著性意義。 ②免疫組織化學(xué)熒光染色結(jié)果：移植治療8周后

8、，NSCs組和BMSCs組PD大鼠腦內(nèi)均有Brd-U陽性細(xì)胞的存在，以紋狀體移植區(qū)居多，且Brd-U陽性細(xì)胞沿同側(cè)胼胝體發(fā)生遷移；紋狀體腦切片均可見一定數(shù)量雙標(biāo)的神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和TH陽性細(xì)胞，且BMSCs組的雙標(biāo)細(xì)胞相對多于NSCs組?？瞻讓φ战M未發(fā)現(xiàn)Brd-U陽性細(xì)胞、微管相關(guān)蛋白2陽性細(xì)胞及TH陽性細(xì)胞的表達(dá)；各組損毀側(cè)黑質(zhì)TH陽性細(xì)胞數(shù)均有所減少，組間黑質(zhì)TH陽性細(xì)胞殘存率基本相似。 結(jié)論： ①NSCs和BM