三株致病性李斯特菌的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、李斯特菌是一類重要的食源性病原微生物，可引起人類和動物的敗血癥、流產(chǎn)、腦膜炎和胃腸炎等臨床癥狀，死亡率可達(dá)30％。老人、兒童和免疫力低下人群最易感。李斯特菌屬有六個菌種，其中只有產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌(Listeria monocytogenes，簡稱LM)和伊萬諾夫李斯特菌(Listeria ivanovii，簡稱LI)具有致病性。LM是引起人類李斯特菌病的主要病原，在其13個血清型中，90％以上的人李斯特菌病由1/2a、1/2b和4b血

2、清型引起。LI極少引發(fā)人類疾病，有少數(shù)動物感染病例報道。本研究分別提取三株致病性李斯特菌(1/2a型產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌LM4、4b型產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌F4636及一株L.ivanovii)的菌體蛋白和分泌蛋白進(jìn)行了比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析，并將二維電泳技術(shù)與免疫印跡技術(shù)結(jié)合對三株李斯特菌的菌體蛋白進(jìn)行了免疫蛋白質(zhì)組學(xué)分析。
　　 在菌體蛋白比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析中，應(yīng)用固相pH梯度二維凝膠電泳獲得了重復(fù)性較好的2-DE凝膠圖譜，利用PDQ

3、uest軟件篩選出差異蛋白質(zhì)，切點進(jìn)行質(zhì)譜分析，用MALDI-TOF/TOF-MS獲得肽質(zhì)量指紋圖譜，MASCOT數(shù)據(jù)庫進(jìn)行搜索，獲得所鑒定蛋白質(zhì)的生物學(xué)信息。通過質(zhì)譜鑒定，得到的20個差異蛋白，功能涉及糖代謝、能量代謝、細(xì)胞周期控制以及宿主侵襲、分子伴侶等眾多事件，為了解致病性李斯特菌的種間差異和遺傳進(jìn)化奠定了基礎(chǔ)。
　　 本研究應(yīng)用免疫蛋白質(zhì)組學(xué)方法檢測三株李斯特菌菌體蛋白，發(fā)現(xiàn)12個具免疫原性蛋白，其中乙酰乳酸合成酶和Fe

4、S組裝蛋白SufD首次發(fā)現(xiàn)具免疫原性，其它蛋白在多種病原微生物中也檢測到免疫原性，為了解李斯特菌的致病機(jī)理，發(fā)現(xiàn)新型毒力因子，開發(fā)有效的李斯特菌疫苗提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　 采用TCA沉淀法分別提取三株李斯特菌分泌蛋白，進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析，初步了解LM與LI在蛋白質(zhì)水平上的差異，質(zhì)譜成功鑒定18個蛋白質(zhì)，主要為李斯特菌毒力相關(guān)蛋白、細(xì)胞壁溶解素、物質(zhì)代謝、能量代謝、分子伴侶等相關(guān)蛋白。發(fā)現(xiàn)上清中出現(xiàn)沒有預(yù)測的信號序列的蛋白