單核細(xì)胞增生李斯特菌菌膜形成突變株的篩選.pdf

1、單核細(xì)胞增生李斯特菌是重要的食源性致病菌，它具有形成菌膜的特性。通過對(duì)功能和調(diào)控基因的研究來探討單核細(xì)胞增生李斯特菌菌膜的形成機(jī)制，可望建立防治該細(xì)菌污染食品的方法。 本文使用電轉(zhuǎn)化的方法，將攜帶轉(zhuǎn)座子Tn917的質(zhì)粒pTV1-OK轉(zhuǎn)化到單核細(xì)胞增生李斯特菌中，并誘導(dǎo)轉(zhuǎn)座，獲得了1880多個(gè)突變株，加上本實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的突變株，使實(shí)驗(yàn)室單核細(xì)胞增生李斯特菌Tn917轉(zhuǎn)座突變株庫增加到2200株。 本文使用96孔細(xì)胞培養(yǎng)板

2、對(duì)隨機(jī)挑選的1000余株突變株進(jìn)行菌膜培養(yǎng)。培養(yǎng)后的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板清洗后用結(jié)晶紫染色，測(cè)OD595值來表示菌膜形成量的篩選依據(jù)，從而挑選到菌膜形成能力變小的突變株8株，目標(biāo)突變獲得率約為8‰。對(duì)篩選出的菌膜形成量變小的突變株進(jìn)行熒光顯微鏡觀察，證實(shí)該8株突變株菌膜形成能力弱于野生菌株。最后通過PCR驗(yàn)證，證明這8株突變株的基因組中有Tn917的插入，這可能是它們表型發(fā)生變化的原因。 以所突變株LM-301基因組DNA為模板，采