EGCG聯(lián)合ARB對(duì)糖尿病腎病大鼠模型治療的研究.pdf

1、研究目的：本課題主要研究氧化應(yīng)激在糖尿病腎病足細(xì)胞損害過程中的作用，作為綠茶主要抗氧化活性成分表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）和血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（氯沙坦）聯(lián)合應(yīng)用能否有效阻止糖尿病腎病的進(jìn)展。本研究以鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)形成1型糖尿病大鼠為研究對(duì)象，以健康組為對(duì)照，探討分別單用EGCG和氯沙坦及EGCG聯(lián)合氯沙坦對(duì)糖尿病腎病大鼠腎功能及NADPH氧化酶表達(dá)的影響從而探討其作用機(jī)制。
　　 研究方法：給SD大鼠一次性

2、腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ，60mg/kg）建立1型糖尿病模型為研究對(duì)象，建模成功后分為氯沙坦組（n=15）、EGCG組（n=15）、氯沙坦+EGCG組（n=15）、糖尿病組（n=15）,以未建模SD大鼠作為對(duì)照的正常組（n=15）。分別以氯沙坦(40mg/kg·d-1灌胃)、EGCG（10mg/ kg·wk-1腹腔注射）干預(yù)治療，糖尿病組和正常組分別以等量無菌生理鹽水灌胃。在第4、8、12周采集各組下腔靜脈血、尿樣本（代謝籠收集24h

3、尿）和腎臟組織（第4、8、12周老鼠取腎）標(biāo)本用生化分析儀檢測(cè)血肌酐、尿素氮、甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、血糖水平，時(shí)間分辨法檢測(cè)24小時(shí)尿白蛋白定量；采用HE、PAS染色法在光鏡下觀察各組大鼠腎小球病理特征，采用電子顯微鏡觀察各組大鼠腎小球足細(xì)胞形態(tài)的改變；Western印跡法測(cè)定各組大鼠腎小球組織NADPH氧化酶Nox4（NADPH oxidase Nox4）蛋白表達(dá)水平并探討活性氧生成機(jī)制；實(shí)時(shí)熒光

4、定量PCR（Real time-PCR）測(cè)定各組大鼠腎小球組織NADPH氧化酶Nox4 mRNA表達(dá)水平并探討活性氧生成機(jī)制。
　　 研究結(jié)果：1. 鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)形成的1型糖尿病大鼠中，第4、8、12周與正常組比較，糖尿病組大鼠血肌酐、尿素氮、甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、24小時(shí)蛋白尿水平均顯著升高，兩組之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與糖尿病組比較，氯沙坦組、EGCG組、氯

5、沙坦+EGCG組大鼠血肌酐、白蛋白、24小時(shí)蛋白尿均減少，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但血糖、尿素氮、甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇均無明顯減少（P>0.05）。與氯沙坦組和EGCG組血比較，氯沙坦+EGCG組血肌酐、血糖、尿素氮、甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、白蛋白、24小時(shí)蛋白尿未見明顯減少，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 2.在第4和12周與正常組比較，糖尿病組大

6、鼠腎小球硬化指數(shù)（glomerular sclerosis index,GSI）明顯升高；與糖尿病組比較，氯沙坦組、EGCG組、氯沙坦+EGCG組大鼠腎小球硬化指數(shù)均降低；與氯沙坦組比較，EGCG組、氯沙坦+EGCG組大鼠腎小球硬化指數(shù)均降低；而EGCG組與氯沙坦+EGCG組大鼠之間腎小球硬化指數(shù)之間差異不明顯。在電子顯微鏡觀察下與正常組比較，糖尿病組大鼠腎小球足細(xì)胞明顯融合，而氯沙坦組少量融合，而EGCG組和氯沙坦+EGCG組足細(xì)胞基

7、本完好。3. 第4、8、12周 氯沙坦組、EGCG組、氯沙坦+EGCG組、正常組Nox4蛋白表達(dá)均低于糖尿病組；與EGCG組和氯沙坦組比較，氯沙坦+EGCG組Nox4蛋白表達(dá)均降低，并且隨著時(shí)間的推移降低更加顯著。4. 第4、8、12周NADPH氧化酶Nox4 mRNA表達(dá)均低于糖尿病組；與EGCG組和氯沙坦組比較，氯沙坦+EGCG組NADPH氧化酶Nox4 mRNA表達(dá)均降低（P<0.05），但不同時(shí)間之間各組之間差異不是很明顯。