B7-H3在宮頸癌發(fā)展中作用的研究.pdf

1、研究背景
　　宮頸癌是全球范圍內(nèi)發(fā)病率較高的婦科惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅女性身心健康。據(jù)報(bào)道，80％的宮頸癌發(fā)生在發(fā)展中國家，而高危型人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的主要危險因素。然而，并非所有高危型HPV感染者都發(fā)展為宮頸癌，只有少數(shù)持續(xù)感染者發(fā)展為宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)，進(jìn)而發(fā)展為宮頸癌。人免疫缺陷病毒(H

2、uman Immunodeficiency Virus，HIV)感染者或長期應(yīng)用免疫抑制劑的女性發(fā)生CIN或?qū)m頸癌的概率顯著增加。這提示宮頸癌的發(fā)生不僅與HPV持續(xù)感染有關(guān)，還與機(jī)體的免疫因素有關(guān)。
　　B7家族屬于免疫共刺激分子，可提供T細(xì)胞免疫應(yīng)答的相關(guān)刺激信號，也可提供限制和減弱T細(xì)胞免疫反應(yīng)的相關(guān)抑制信號，在腫瘤疾病、器官移植和自身免疫病中發(fā)揮重要作用。B7家族已知成員包括B7-1(CD80)，B7-2(CD86)，B7-

3、H1(PD-L1), B7-H2(ICOSL), B7-DC(PD-L2), B7-H3(CD276), B7-H4(B7X)。B7-H3是于2001年被克隆的B7家族成員，目前發(fā)現(xiàn)其有兩種存在形式:2Ig-B7-H3和4Ig-B7-H3。2Ig-B7-H3表達(dá)于鼠與人的細(xì)胞中，其有細(xì)胞外的IgV-IgC結(jié)構(gòu);4Ig-B7-H3僅表達(dá)于人細(xì)胞中，由串聯(lián)重復(fù)的IgV-IgC-IgV-IgC結(jié)構(gòu)組成。B7-H3廣泛表達(dá)于各種器官及細(xì)胞中，例

4、如肺，乳腺，肝臟，胎盤，前列腺以及樹突細(xì)胞等。研究顯示，B7-H3異常高表達(dá)于多種癌細(xì)胞或組織中，包括前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、肝癌、結(jié)腸癌、骨肉瘤以及血液系統(tǒng)惡性疾病。B7-H3與B7-H1(PD-L1)有相似的分子結(jié)構(gòu)，現(xiàn)已證實(shí)腫瘤細(xì)胞表達(dá)的B7-H1(PD-L1)與T細(xì)胞表面的PD-1結(jié)合，可以下調(diào)T細(xì)胞功能，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，目前針對PD-1/PD-L1(B7-H1)的腫瘤免疫治療藥物已應(yīng)用于黑色素瘤等的臨

5、床治療。但是，B7-H3在腫瘤免疫方面的功能尚未明確，有文獻(xiàn)報(bào)道，B7-H3可下調(diào)T輔助1型介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，抑制CD4+T細(xì)胞活化，并抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生，因而可能發(fā)揮促進(jìn)癌細(xì)胞免疫逃逸的作用。
　　除了可能在腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮作用外，B7-H3還可能影響腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特征，并與部分腫瘤的預(yù)后不良相關(guān)。臨床腫瘤研究顯示，B7-H3分子在肺癌、大腸癌、胰腺癌等癌組織中存在高表達(dá)，其高表達(dá)與腫瘤的擴(kuò)散或預(yù)后較差具有相關(guān)性

6、。細(xì)胞學(xué)水平的研究顯示，B7-H3在胰腺癌、前列腺癌、黑色素瘤等腫瘤細(xì)胞系中的高表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。B7-H3影響腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特征的原因尚不明確。
　　目前，B7-H3分子在宮頸癌中的表達(dá)及其作用尚缺乏研究。本研究擬探討B(tài)7-H3在宮頸癌中的表達(dá)情況及其與宮頸癌患者病情和預(yù)后的關(guān)系，并探討B(tài)7-H3在宮頸癌細(xì)胞增殖、侵襲及遷移中的作用。
　　研究方法
　　1.臨床病理研究:納入宮頸癌患者和正常對照者，通過

7、免疫組織化學(xué)方法檢測B7-H3分子在宮頸癌患者組織標(biāo)本和正常宮頸組織標(biāo)本中的表達(dá)情況并進(jìn)行對比，分析其表達(dá)水平與患者病理改變、臨床分期和疾病預(yù)后的關(guān)系;
　　2.B7-H3在血液中表達(dá)情況的研究:運(yùn)用ELISA檢測B7-H3在宮頸癌患者血液標(biāo)本和正常對照組患者血液標(biāo)本中的表達(dá)情況，并進(jìn)行對比;
　　3.細(xì)胞學(xué)試驗(yàn):
　　(1)構(gòu)建細(xì)胞系:構(gòu)建質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染宮頸癌細(xì)胞系，上調(diào)或下調(diào)Caski、Siha和Hela宮頸癌細(xì)胞系中

8、B7-H3分子表達(dá);運(yùn)用Western Blot驗(yàn)證細(xì)胞系構(gòu)建是否成功;
　　(2)探討B(tài)7-H3表達(dá)對宮頸癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響:通過MTT技術(shù)檢測細(xì)胞增殖情況;通過Transwell體系檢測細(xì)胞侵襲及遷移情況。
　　研究結(jié)果:
　　1.B7-H3在宮頸癌組織中的表達(dá)顯著高于正常宮頸組織(p＜0.05)，其表達(dá)強(qiáng)度與TNM分期相關(guān)(r=0.509，p＜0.001);
　　2.B7-H3表達(dá)強(qiáng)陽性的患者5年生

9、存率顯著低于B7-H3表達(dá)弱陽性或陰性的患者，Cox分析顯示B7-H3高表達(dá)是宮頸癌患者死亡的危險因素(HR=4.463，p=0.035);
　　3.B7-H3在宮頸癌患者血液中的表達(dá)顯著高于對照組血液中的表達(dá)。
　　4.Western Blot結(jié)果顯示:B7-H3表達(dá)上調(diào)及下調(diào)宮頸癌細(xì)胞系構(gòu)建成功。
　　5.MTT結(jié)果顯示:B7-H3表達(dá)上調(diào)宮頸癌細(xì)胞增殖能力高于正常對照組及表達(dá)下調(diào)組(p＜0.05); B7-H3表

10、達(dá)下調(diào)宮頸癌細(xì)胞增殖能力低于正常對照組及表達(dá)上調(diào)組(p＜0.05)。
　　6.Transwell結(jié)果顯示: B7-H3表達(dá)上調(diào)宮頸癌細(xì)胞遷移及侵襲能力高于正常對照組(p＜0.05); B7-H3表達(dá)下調(diào)宮頸癌細(xì)胞遷移及侵襲能力低于正常對照組(p＜0.05)。
　　研究結(jié)論:
　　1.B7-H3在宮頸癌組織及血液中表達(dá)升高，其在宮頸癌組織的表達(dá)與患者臨床分期和預(yù)后相關(guān);
　　2.B7-H3能夠增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞的增殖及