B7-H3在前列腺癌骨轉(zhuǎn)移中作用的初步研究.pdf

1、目的
　　 前列腺癌(prostatecancer，PCa)是男性最常見的惡性腫瘤之一，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是前列腺癌患者死亡的最主要原因，前列腺癌容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的確切機(jī)制目前尚不清楚。大量的研究發(fā)現(xiàn)前列腺癌中B7-H3的表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系。B7-H3是由Chapoval等人發(fā)現(xiàn)的B7協(xié)同共刺激分子(costimulatorymolecule)家族成員之一。后來，有研究發(fā)現(xiàn)B7-H3可以介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞之間以及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)蛋白之

2、間的粘附，B7-H3粘附功能的發(fā)現(xiàn)為解釋該分子在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用提供了新的線索。本研究旨在初步探索B7-H3在前列腺癌骨轉(zhuǎn)移中的作用，為研究B7-H3在腫瘤轉(zhuǎn)移中的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　 方法
　　 實(shí)驗(yàn)共分為三部分:
　　 (1)利用B7-H3過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染前列腺癌LNCap細(xì)胞，得到穩(wěn)定過表達(dá)B7-H3的前列腺癌細(xì)胞B7-H3/LNCap，并通過實(shí)時(shí)定量PCR(real-timePCR)、逆轉(zhuǎn)錄PCR(r

3、eversetranscriptionPCR，RT-PCR)及流式細(xì)胞技術(shù)(flowcytometry，F(xiàn)CM)對該轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
　　 (2)前列腺癌轉(zhuǎn)染前、后體外生物學(xué)功能的檢測，包括:基質(zhì)-細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞粘附能力;劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞水平遷移能力;Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲力;凋亡實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞對不良環(huán)境的抵抗力;酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)檢

4、測細(xì)胞上清中基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrixmetalloproteinase9，MMP-9)的分泌情況。
　　 (3)對部分前列腺癌患者的組織標(biāo)本進(jìn)行了B7-H3的免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry，IHC);并進(jìn)行了轉(zhuǎn)染前、后的動物模型實(shí)驗(yàn)。
　　 結(jié)果
　　 (1)轉(zhuǎn)染后的前列腺癌細(xì)胞株B7-H3/LNCap通過real-timePCR、RT-PCR及FCM的鑒定，從mRNA和蛋白質(zhì)水平上

5、均發(fā)現(xiàn)B7-H3的表達(dá)量顯著高于未轉(zhuǎn)染組LNCap。
　　 (2)通過比較轉(zhuǎn)染前、后兩組細(xì)胞的相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，B7-H3/LNCap組細(xì)胞的粘附能力、遷移能力、侵襲能力和抗凋亡的能力顯著高于未轉(zhuǎn)染組LNCap，過表達(dá)組細(xì)胞上清中MMP-9的含量也顯著高于未轉(zhuǎn)染組。
　　 (3)臨床組織標(biāo)本的免疫組化結(jié)果顯示，前列腺癌組織中B7-H3的表達(dá)顯著高于正常組。在動物模型中，B7-H3/LNCap組的腫瘤明顯大于LNCap組。