共信號分子B7-H3與結直腸癌侵襲相關性的初步研究.pdf

1、目的:
　　共信號分子B7-H3作為重要的免疫分子，在結直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮關鍵作用。結直腸癌多伴隨肝轉移，研究證明其與基質金屬蛋白酶(MMPs)相關。有文獻報道:在結直腸癌的患者中常伴有B7-H3的異常表達，且和預后呈負相關關系。本論文擬從B7-H3的非免疫學功能的角度，以結直腸癌腫瘤標本和結直腸癌細胞株SW480為研究對象，分析結直腸癌中B7-H3和MMPs家族成員MMP2、MMP9表達水平的相關關系，研究B7-H3對結

2、腸癌細胞侵襲能力的調控作用。
　　方法:
　　1、利用免疫組化方法對87例結直腸癌標本進行B7-H3、MMP2和MMP9染色，并按表達強弱進行評分，分別為陰性0，弱陽性1+，陽性2+，強陽性3+。
　　2、構建人B7-H3全長基因重組表達載體，并轉染SW480，經(jīng)篩選、Real-timePCR、WesternBlot、激光共聚焦等方法驗證，構建高表達B7-H3的結直腸癌細胞SW480穩(wěn)定株。
　　3、瞬時轉染B7

3、-H3siRNA片段，建立SW480-B7-H3+kd敲減模型;B7-H3高表達或干擾后，WesternBlot檢測MMP2和MMP9的表達，Transwell分析細胞的侵襲能力。
　　結果:
　　1、結直腸癌患者腫瘤中B7-H3的表達與TNM分期的T分期有關，與N分期無關;B7-H3的表達與MMP2、MMP9呈正相關，特別與MMP9具有較好的線性關系。
　　2、成功構建SW480穩(wěn)轉對照株和高表達B7-H3的SW48

4、0穩(wěn)轉株，分別命名為SW480-NC和SW480-B7-H3。
　　3、成功構建B7-H3敲減細胞株，命名為SW480-B7-H3+kd;B7-H3高表達后，MMP2和MMP9的表達水平升高，細胞侵襲能力顯著增強;反之，B7-H3表達被干擾后，MMP2和MMP9的表達降低，細胞侵襲能力隨之減弱。
　　結論:
　　1、結直腸癌組織中B7-H3的表達與腫瘤侵襲深度有關，與區(qū)域淋巴結轉移無關，且與基質金屬蛋白酶MMP2和MM

5、P9關系密切。
　　2、建立穩(wěn)轉細胞株后，可對B7-H3在結直腸癌中發(fā)揮的生物學功能及其參與的信號通路進行深入的研究。
　　3、結直腸癌細胞中高表達的B7-H3可以上調細胞侵襲相關的金屬蛋白酶的表達，促進腫瘤細胞的侵襲和轉移。
　　綜上所述，本論文從細胞和組織水平上證實，結直腸癌中B7-H3的表達與基質金屬蛋白酶的表達呈正相關，促進腫瘤細胞的侵襲和轉移。構建的高表達B7-H3的結直腸癌穩(wěn)轉株SW480-B7-H3已成為