白細(xì)胞介素-23受體在克羅恩病中的表達(dá)及作用機(jī)制研究.pdf

1、克羅恩病(Crohn's Disease，CD)作為是一種腸道非特異性炎性肉芽腫性疾病，其發(fā)病機(jī)制與Th17細(xì)胞的細(xì)胞免疫有關(guān)。同時在Th17細(xì)胞的分化過程中，IL-23/IL-17信號通路起到關(guān)鍵作用。而IL-23R的具體作用，目前不詳。
　　本研究檢測CD和正常人在腸道黏膜中的IL-23R和IL-17A的表達(dá)。同時在體外應(yīng)用磁珠分選人外周血的CD4+T細(xì)胞，并由細(xì)胞因子誘導(dǎo)分化成Th17細(xì)胞。同時應(yīng)用外源性加入抗人IL-23R

2、單克隆抗體，觀察其對Th17細(xì)胞的分化影響。
　　第一部分白細(xì)胞介素23受體、白細(xì)胞介素17A在克羅恩病中的表達(dá)及臨床意義
　　目的:通過檢測白細(xì)胞介素23受體(IL-23R)及白細(xì)胞介素17A(IL-17A)在克羅恩病(CD)患者腸黏膜中的表達(dá)水平，探討其在CD發(fā)病過程中的作用及意義。方法:收集32例克羅恩病(CD)患者及27例對照者的內(nèi)鏡腸黏膜活檢標(biāo)本，采用熒光定量PCR技術(shù)檢測腸黏膜內(nèi)IL-23R、IL-17A mRN

3、A的表達(dá)情況，免疫組化技術(shù)分析IL-23R、IL-17A在腸黏膜中的原位表達(dá)。結(jié)果:與健康對照組相比，CD患者腸黏膜組織內(nèi)IL-23R mRNA表達(dá)顯著增高（P＜0.05)。CD患者腸黏膜組織內(nèi)IL-17A mRNA表達(dá)顯著增高(P＜0.05)。免疫組化分析顯示IL-23R陽性細(xì)胞在CD在腸黏膜固有層內(nèi)有較多表達(dá)，較正常黏膜內(nèi)的腸上皮細(xì)胞相比，CD患者腸黏膜IL-23R蛋白表達(dá)量最著增高（P＜0.05)。IL-17A陽性細(xì)胞在CD腸黏膜

4、固有層內(nèi)有較多表達(dá)，較正常黏膜內(nèi)的腸上皮細(xì)胞相比，CD患者腸黏膜IL-17A蛋白表達(dá)量最著增高（P＜0.05)。結(jié)論:IL-23R及IL-17A在CD患者腸黏膜中表達(dá)顯著增高，提示IL-23R及IL-17A表達(dá)異常與CD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，有可能成為CD治療的新靶點(diǎn)。
　　第二部分 IL-23R抗體對外周血CD4+T細(xì)胞分化的影響
　　目的:觀察抗人IL-23R單克隆抗體對于CD4+T細(xì)胞分化為Th17細(xì)胞的過程的影響。方法

5、:收集人外周血細(xì)胞，應(yīng)用磁珠分選出CD4+T細(xì)胞，并應(yīng)用TNF-β1和IL-6誘導(dǎo)分化成Th17細(xì)胞，在應(yīng)用IL-23R單克隆抗體干預(yù)Th17細(xì)胞的分化過程。應(yīng)用熒光定量PCR和Western-Blot檢測IL-23R、ROR-γ和IL-17A的表達(dá)。結(jié)果:應(yīng)用磁珠分選可以提取CD4+T細(xì)胞，同時應(yīng)用細(xì)胞因子(TNF-β1和IL-6)誘導(dǎo)分化成Th17細(xì)胞，同時IL-23R、ROR-γ和IL-17A的表達(dá)明顯增高。在Th17細(xì)胞的分化過