組蛋白去乙?；?、3在食管鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、食管癌(Carcinomaofesophageal)是惡性程度高的消化系腫瘤,其發(fā)病率近幾年來在國內(nèi)外均有逐年上升趨勢。95%的食管癌患者為鱗狀細(xì)胞癌。由于食管癌在臨床上缺乏特異表現(xiàn),惡性程度高,極易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。目前食管癌早期臨床診斷仍缺乏有效的方法,患者確診時(shí)大多已發(fā)生轉(zhuǎn)移,喪失手術(shù)時(shí)機(jī)。患者的預(yù)后目前傳統(tǒng)治療手段均未能顯著改善,因此食管癌的治療新途徑需通過食管癌發(fā)生、發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制尋找。
　　 表觀遺傳學(xué)(Epigene

2、tics)是指在基因DNA序列沒有發(fā)生改變的情況下,基因功能發(fā)生了可遺傳的變化,并最終導(dǎo)致了表型變化。細(xì)胞的增殖分化是通過DNA甲基化和組蛋白修飾調(diào)控細(xì)胞在適當(dāng)?shù)目臻g和時(shí)間位置表達(dá)適當(dāng)?shù)幕?。在哺乳動物?xì)胞中,乙?；腿ヒ阴；钠胶庠诨蜣D(zhuǎn)錄和不同細(xì)胞蛋白功能中起到關(guān)鍵的作用。組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HistoneAcetyltransferases,HATs)和組蛋白去乙酰化酶(HistoneDeacetylases,HDACs)調(diào)節(jié)組蛋白

3、乙?；癄顟B(tài),控制著染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和基因的表達(dá),它們的功能紊亂是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要分子機(jī)制之一。
　　 HDACs共有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四類。Ⅰ類HDACs包括HDAC1、2、3、8;HDACs在基因阻遏、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和分化、染色質(zhì)重塑中起到重要作用。腫瘤細(xì)胞中HDACs功能異?？蓪?dǎo)致許多基因轉(zhuǎn)錄抑制,抑制抑癌基因表達(dá)。HDACs抑制劑通常針對Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ類HDAC為靶點(diǎn),目前己在臨床試驗(yàn)中進(jìn)行評估。
　　 有研究表明在早期大腸癌

4、的息肉階段HDAC2的上調(diào)比HDAC1更高。在宮頸不典型增生和浸潤癌在異型增生過渡區(qū),HDAC2的表達(dá)比HDAC1明顯高染色。在胃癌,腸癌和前列腺癌中HDAC2與HDAC1和3的表達(dá)是與疾病的晚期和預(yù)后不良相關(guān)。大樣本的胃癌,前列腺癌和大腸癌研究中,HDAC3和HDAC1,2的表達(dá)與預(yù)后不良顯著相關(guān)。Ⅰ類HDACs被許多學(xué)者認(rèn)為是癌癥治療最相關(guān)的目標(biāo),因?yàn)橐种苿┚哂锌笻DAC1、2、3的活性,通常顯示出強(qiáng)抗增殖和誘導(dǎo)凋亡的活性。HDAC

5、1過表達(dá)在胃腸系統(tǒng)癌癥尤為常見,是與去分化提高增殖,侵襲,疾病進(jìn)展和不良預(yù)后有關(guān)。然而這些研究大多是對HDAC1,所以我們認(rèn)為HDAC2,3在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中可能起到重要作用。
　　 截止目前HDAC2、3在食管鱗癌中的表達(dá)及其在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展中的作用研究尚無報(bào)道。因此有必要利用分子生物學(xué)的方法對HDAC2、3基因在食管鱗癌組織中表達(dá)水平進(jìn)行檢測,了解其在食管鱗癌發(fā)病機(jī)制中的作用,并分析與患者臨床和病理特性的相關(guān)性,以尋找

6、治療食管癌的新途徑,為食管癌的基因治療提供候選靶點(diǎn)。
　　 本研究包括三部分內(nèi)容,分述如下。
　　 一、HDAC2、3mRNA在人食管鱗癌組織中表達(dá)的研究
　　 目的:檢測組蛋白去乙酰化酶2、3在食管鱗癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況,探討組蛋白去乙酰化酶2、3在食管鱗癌中的作用。
　　 方法:收集30例手術(shù)切除的食管鱗癌組織及相應(yīng)的癌旁組織和5例正常食管組織,采用real-timeRT-PCR法(SYBRG

7、REEN法)檢測上述來源組織中HDAC2、3基因mRNA的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:以正常食管組織為對照,30例食管鱗癌組織和癌旁組織中HDAC2mRNA表達(dá)量(5.45±2.58)明顯高于癌旁組織組(3.98±2.98),兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.541,P＜0.01);HDAC3mRNA水平上明顯高于癌旁組織組(4.97±3.88vs2.18±2.04),兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.443,P＜0.01)。
　

8、　 結(jié)論:食管鱗癌組織中HDAC2mRNA和HDAC3mRNA的表達(dá)明顯高于癌旁組織,表明HDAC2、3基因的異常激活可能在食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展中起到重要的作用。
　　 二、HDAC2、3蛋白在人食管鱗癌組織中表達(dá)的研究
　　 目的:檢測組蛋白去乙?；?、3在食管鱗癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況,探討組蛋白去乙?；?、3在食管鱗癌中的作用。
　　 方法:收集30例手術(shù)切除的食管鱗癌組織及相應(yīng)的癌旁組織和5例正

9、常食管組織,采用Westernblot方法檢測上述來源組織中HDAC2、3蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:HDAC2在癌組織中蛋白的表達(dá)明顯高于癌旁組織及5例正常組織。不同分化組癌組織HDAC2表達(dá)量均高于癌旁組織,高分化(0.86±0.05vs0.39±0.08,P＜0.01),中分化(1.35±0.10vs1.02±0.13,P＜0.01),低分化(1.51±0.09vs0.53±0.05,P＜0.01);HDAC3在癌組織中

10、蛋白的表達(dá)明顯高于癌旁組織及5例正常組織。不同分化組癌組織HDAC3表達(dá)量均高于癌旁組織,高分化(0.74±0.06vs0.35±0.10,P＜0.01),中分化(1.24±0.09vs0.89±0.10,P＜0.01),低分化(1.46±0.08vs0.49±0.04,P＜0.01)。
　　 結(jié)論:食管鱗癌組織中HDAC2和HDAC3蛋白的表達(dá)明顯高于癌旁組織,表明HDAC2、3基因的異常激活與食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

11、　　 三、人食管鱗癌組織中HDAC2和HDAC3的表達(dá)與臨床表現(xiàn)和病理的相關(guān)性研究
　　 目的:檢測HDAC2和HDAC3蛋白在人食管鱗癌組織中的表達(dá)情況,分析食管鱗癌組織中HDAC2和HDAC3蛋白表達(dá)水平與臨床表現(xiàn)和病理的相關(guān)性。
　　 方法:收集2007年10月-2010年10月江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院手術(shù)切除的90例食管鱗癌患者的食管鱗癌組織,同時(shí)收集患者臨床資料。所有病例均經(jīng)病理確診為食管鱗狀細(xì)胞癌。采用鏈霉素抗生物

12、素-過氧化酶(streptavidinperoxidase,SP)免疫組織化學(xué)法檢測食管鱗癌組織中HDAC2和HDAC3蛋白表達(dá)。根據(jù)核染色強(qiáng)度和核陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行判斷,強(qiáng)度:0(無染色),1(弱染色),2(中度染色),3(強(qiáng)染色);核陽性細(xì)胞百分比:0(無),1(＜10%),2(10-50%),3(51-80%),4(＞80%)。染色指數(shù)范圍從0到12(核染色強(qiáng)度和核陽性細(xì)胞百分比相乘)(0-6低表達(dá),8-12高表達(dá))。
　　

13、 結(jié)果:HDAC2和HDAC3在食管鱗癌細(xì)胞癌細(xì)胞核染色,陽性細(xì)胞為棕黃色。在非腫瘤細(xì)胞中偶見陽性細(xì)胞。HDAC2陽性表達(dá)率79%(71/90),HDAC3陽性表達(dá)率為70%(63/90)。分析HDAC2和HDAC3蛋白表達(dá)強(qiáng)度與臨床病理參數(shù)的關(guān)系,HDAC2和HDAC3表達(dá)強(qiáng)度與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P＜0.05),而與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤位置、病理學(xué)大體分型、浸潤深度及分化程度無關(guān)(P＞0.05)。HDAC2和HD

14、AC3在食管鱗癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.790,P＜0.01)。
　　 結(jié)論:在食管鱗癌組織中HDAC2和HDAC3高表達(dá)在食管鱗癌的侵襲力及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中起到重要的作用。
　　 通過上述研究,本課題得出以下結(jié)論:
　　 1、食管鱗癌組織中HDAC2和HDAC3mRNA較食管鱗癌癌旁組織表達(dá)高。
　　 2、HDAC2和HDAC3蛋白在食管鱗癌組織表達(dá)明顯高于癌旁組織,食管鱗癌組織中HDAC2和HDAC