ARHI基因在卵巢腫瘤組織中的表達及組蛋白去乙酰化酶抑制劑對其影響的研究.pdf

1、目的：觀察印跡抑癌基因ras同源家族I(A ras homologue member I，ARHI)在卵巢腫瘤組織中的表達分布特點，并探討其與卵巢腫瘤的組織學(xué)分型和惡性腫瘤臨床分期的關(guān)系。同時利用組蛋白去乙酰化酶抑制劑(histone deacetylaseinhibitors,HDACIs)干預(yù)卵巢癌細胞株的生長，觀察細胞生長抑制率，探討HDACIs對卵巢癌細胞株中ARHI基因表達的影響。 方法 1、所取卵巢腫瘤組織均

2、為新鮮標本，正常卵巢組織10例、卵巢良性腫瘤13例、卵巢交界性腫瘤5例、卵巢惡性腫瘤33例，取后置于-80℃保存。利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測ARHI的mRNA表達，分析比較ARHI基因表達與腫瘤良、惡性及卵巢惡性腫瘤臨床分期、腫瘤組織學(xué)分型的關(guān)系。 2、組蛋白去乙?；敢种苿?HDACIs)有效抑制細胞中組蛋白去乙酰

3、化酶，曲谷抑菌素(Trichostain A,TSA)是其中一種高效抑制劑。選取卵巢腫瘤四種細胞株：COCl為懸浮細胞，SKOV3、A2780、OC3為貼壁細胞，四種均屬卵巢腫瘤惡性程度較高的細胞系。采用四甲基偶氮唑藍MTT比色法檢測不同濃度TSA和順鉑對四種卵巢癌細胞系體外生長的抑制作用。應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測卵巢癌細胞自然生長組和藥物作用組中ARHI mRNA的表達水平。 結(jié)果 1、ARHI基因與卵巢惡性腫瘤病理

4、生物學(xué)特征的相關(guān)性研究。不同程度不同分型的卵巢腫瘤組織中ARHI基因表達存在不同的差異。 (1)正常卵巢組織中ARHI基因的表達陽性率為100％(10/10)；13例卵巢良性腫瘤中10例表達陽性(77％，10/13)，3例表達缺失(23％，3/13)。5例交界性腫瘤中3例ARHI表達為陽性，2例表達缺失，缺失率為40％(2/5)。33例惡性腫瘤組織中僅有11例有表達，缺失率為67％(11/33)。 (2)ARHI基因的表

5、達與卵巢腫瘤的良、惡性有關(guān)，與卵巢惡性腫瘤的組織學(xué)分型無關(guān)(p>O.05)，與卵巢腫瘤臨床分期有關(guān)(pO.05)。其它三組進行兩兩比較，無顯著差異(p>O.05)。ARHI基因mRNA表達水平

6、與卵巢癌臨床分期呈負相關(guān)(D0.05)，Ⅱ期與Ⅲ、Ⅳ期之間有顯著差別(p<0.05)，Ⅲ期與Ⅳ期間有顯著差別(p<0.05)。 2、TSA對卵巢癌細胞株生長及ARHI表達的影響 (1)不同濃度TSA(100nmolFL、200nmol/L、300nmol/L、400nmol/L)和順鉑(10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、

7、80μmol/L、200μmol/L)作用不同時間后對四種細胞均有明顯抑制作用，隨著濃度時間增加，細胞受抑制程度明顯增強(pO.05)。順鉑(cisplatin，CDDP)對四種細胞均有明顯的抑制作用，與濃度時間成相關(guān)關(guān)系(p

8、用沒有顯著差別(p>O.05)。 (2)有效濃度TSA(250nmol/L)和順鉑(80μmol/L)作用48h后存活的卵巢癌細胞A2780、COCl、OC3中ARHI mRNA的表達與未加藥的空白對照組沒有差別，而SKOV3細胞TSA作用后ARHI的表達量明顯高于順鉑對照組和空白對照組。TSA作用后SKOV3細胞系中ARHI mRNA平均表達水平為0.087±0.01，順鉑作用后四種細胞系均沒有ARHI表達。 結(jié)

9、論： 1、ARHI/NOEY2基因在正常卵巢組織中表達，在卵巢腫瘤組織中有低表達或缺失。 2、ARHI基因在卵巢腫瘤不同組織學(xué)分型中表達無差異，但在不同腫瘤分期本文詳細研究了低碳鋼冷擠壓成形的摩擦潤滑機理，從理論上分析了磷化-皂化膜的成膜機理、潤滑機理以及影響成膜質(zhì)量的各種因素。同時利用金相顯微鏡、掃描電鏡、電子探針以及X射線衍射儀等試驗手段對中溫鋅系磷化-皂化膜的表面形貌、截面形貌、組織結(jié)構(gòu)及成分進行了實測分析，主

10、要發(fā)現(xiàn)： (1)中溫鋅系磷化膜主要以磷酸鋅(H膜)為主，并有少量磷酸鋅鐵(P膜)存在；磷化膜的表面有棒狀和球狀兩種形貌存在；磷化膜截面是層狀結(jié)構(gòu)，各層間間距略有不同；磷化膜層厚度約為20μm。 (2)經(jīng)過皂化后的磷化膜膜層分為磷酸鋅、硬脂酸鋅和硬脂酸鈉三層。最外層為硬脂酸鈉，呈棉絮狀結(jié)構(gòu)，次外層為硬脂酸鋅，最內(nèi)層為磷酸鋅。 (3)變形后還有殘留磷化-皂化膜的部位潤滑效果良好。 (4)變形中工件表面各部位磷

11、化-皂化膜層的變形量不同。外側(cè)表面的磷化-皂化膜厚度變薄率從上而下先由小到大，再到??；內(nèi)側(cè)表面的磷化-皂化膜厚度變薄率從上而下逐漸變大。 (5)變形中各部位材料的變形量不同。上部材料變形量較小，沿高度尺寸向下，材料的變形量逐漸增大，達到工件的中部時(凹模出口部位)，材料的變形量達到最大，隨高度尺寸再往下時，材料的變形量又逐漸變小。 (6)成形工件中部(凹模出口部位)摩擦較大，潤滑效果不好，極易出現(xiàn)劃痕。 實驗結(jié)果