巴曲亭止血機理的研究與2例植物固醇血癥的研究.pdf

1、第一部分：巴曲亭及其有效成分止血機制的研究
　　 蛇毒中含有許多不同生物活性的酶類，有些酶類作用于血液凝固酶促級聯(lián)反應(yīng)過程中的一個或多個環(huán)節(jié)，可激活FⅤ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、FⅡ或直接使纖維蛋白原凝集。很多蛇毒成分已運用于出血或血栓性疾病的診斷和治療。蛇毒類凝血酶(Thrombin-likeenzyme，TLE)為絲氨酸蛋白酶，是蝮亞科蛇毒中一個具有促凝血活性的組成成份，能直接作用于纖維蛋白原，促進血液凝固。不同來源的蛇毒類凝血酶

2、對血漿纖維蛋白原的作用方式不同。根據(jù)類凝血酶作用于纖維蛋白原所得產(chǎn)物不同將其分為三類：①只釋放纖維蛋白肽A，即SVTLE-A，如巴曲酶佃(bathroxobin)；②只釋放纖維蛋白肽B，即SVTLE-B，如銅頭蝮蛇毒類凝血酶(Trimeresurusokinavensis)；③既釋放纖維蛋白肽A又釋放纖維蛋白肽B，即SVTLE-AB，如巴西窩面蝰蛇毒(B.jararacussuvenom)。巴曲亭（注射用蛇毒血凝酶）為巴西矛頭蝮蛇（Bo

3、thropsatrox）毒液中分離出來的止血成份，包括兩種有效成分：巴曲酶及少量凝血因子X激活物(FXA)。巴曲酶直接作用于纖維蛋白原Aa鏈Arg16-Gly17處，釋放纖維蛋白肽A后形成纖維蛋白單體Ⅰ，但不降解纖維蛋白B肽，亦不直接激活FⅩⅢ，因此不能形成穩(wěn)定的纖維蛋白。FⅩA可以直接激活FⅩ，從而激活凝血酶原，使纖維蛋白原降解成纖維蛋白，并激活FⅩⅢ，形成穩(wěn)定的纖維蛋白。巴曲亭已廣泛用于神經(jīng)外科、婦科與骨科手術(shù)，以及消化道與呼吸道出

4、血，臨床上有較滿意的止血效果，但有關(guān)實驗研究資料較少，至今尚無對出血性疾病的治療方面的實驗研究。
　　 目的：研究巴曲亭及其有效成分的止血機理及對出血性疾病的止血作用。
　　 方法：檢測巴曲亭及其有效成分巴曲酶與凝血因子Ⅹ激活物(FXA)對正常人及出血性疾病患者血漿的活化部分凝血活酶時間(APTT)與凝血酶原時間(PT)的影響，用發(fā)色底物法檢測FXA、巴曲酶及巴曲亭對凝血因子Ⅹ(FⅩ)活化及凝血酶生成的影響。
　　

5、 結(jié)果：巴曲亭及其有效成分可以縮短正常人血漿的APTT，且在一定劑量范圍內(nèi)存在量效關(guān)系，并可糾正出血性疾病患者延長的APTT。FXA、巴曲酶及巴曲亭對PT無明顯影響。FXA能促進FX的活化及凝血酶的生成，巴曲酶及巴曲亭對二者無明顯作用。
　　 結(jié)論：1．巴曲亭有明顯的促進凝血的效果，并可糾正出血性疾病的止血異常。其有效成分巴曲酶直接作用于纖維蛋白原，而FXA通過活化FX導(dǎo)致凝血酶的形成。
　　 2．巴曲亭可糾正血友病、

6、VWD的止血異常，提示可成為出血性疾病新的治療方法，但對無纖維蛋白原血癥患者無效。從藥理作用及實驗結(jié)果看，巴曲亭不適用于無纖維蛋白原血癥、纖溶亢進及彌散性血管內(nèi)凝血引起的出血。
　　 第二部分：2例伴有巨大血小板減少和溶血性貧血的植物固醇血癥的臨床和基因研究
　　 植物固醇血癥(Phytosterolemia)，又稱β-谷固醇血癥，是一種罕見的常染色體陰性遺傳性脂質(zhì)代謝性疾病，至今僅有100例左右的報道，其主要表現(xiàn)為黃褐

7、瘤、早發(fā)型冠心病、動脈粥樣硬化及關(guān)節(jié)炎等。近年來發(fā)現(xiàn)有血液學(xué)尤其是巨大血小板減少伴溶血性貧血的血細(xì)胞改變，表明血液系統(tǒng)改變是植物固醇血癥的一個新的亞型。最近我們遇到2例來自不同家系的患者表現(xiàn)為巨大血小板減少、溶血性貧血及脾腫大，同時血漿中植物固醇含量明顯升高、ABCG5或ABCG8存在純合突變。對這種伴有特征性血液學(xué)改變的植物固醇血癥患者進行臨床特性的研究，有助于臨床醫(yī)生正確的認(rèn)識、診斷和治療本病。
　　 目的：研究2例伴有巨大

8、血小板減少和溶血性貧血的植物固醇血癥患者的臨床表型和基因診斷。
　　 方法：光學(xué)顯微鏡觀察紅細(xì)胞及血小板的形態(tài)；流式細(xì)胞儀(FCM)檢測血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰ/Ⅸ和Ⅱb/Ⅲa;比濁法分析血小板聚集；高效液相色譜法（HPLC）檢測血漿中豆固醇、二氫膽固醇和谷固醇；PCR結(jié)合測序分析患者ABCG5和ABCG8基因外顯子和側(cè)翼序列，尋找基因突變；同時用PCR-RFLP法分析基因多態(tài)性。
　　 結(jié)果：2例患者均有巨大血小板減少

9、和溶血性貧血的表現(xiàn)，均伴有皮膚黃褐瘤和血液系統(tǒng)的改變。血漿中植物固醇尤其是谷固醇顯著升高，是正常人30倍左右；基因分析發(fā)現(xiàn)2個突變，ins12283C、ISV7+3G＞A，均為新的突變位點。
　　 結(jié)論：1．鑒定了2例植物固醇血癥患者，患者均有巨大血小板減少和溶血性貧血，基因分析發(fā)現(xiàn)ins12283C、ISV7+3G＞A兩個國際上尚未報道的突變。
　　 2．植物固醇血癥患者可作為巨大血小板減少伴或不伴溶血性貧血患者一個新