吡咯烷二硫代氨基甲酸酯及吡格列酮保護糖尿病大鼠腎臟機制的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 本研究旨在探討高糖高脂喂養(yǎng)結(jié)合小劑量STZ誘導(dǎo)的2型糖尿病大鼠腎臟組織NF-κB p65、MCP-1表達與腎臟組織結(jié)構(gòu)和功能改變之間的關(guān)系；并通過觀察吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)、吡格列酮(PIO)以及PDTC聯(lián)合PIO藥物干預(yù)對2型糖尿病大鼠腎組織核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)p65及單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)表達的影響，以探討上述兩種藥物對2型糖尿病腎臟保護的作用機制。
　　 方法：

2、>　　 SPF級SD雄性大鼠50只，隨機分為2組：正常對照組(NC組，n=10只)，給予普通飼料喂養(yǎng)；模型組45只，給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)。4周后，一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)(30 mg·kg-1)制備2型糖尿病大鼠模型。72h后，尾靜脈采血測兩次隨機血糖＞16.7mmo1·L-1，確定40只為造模成功大鼠。成模大鼠繼續(xù)給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，并隨機分為4組：糖尿病對照組(DM組，n=10只)、PDTC治療組(PDTC組，n=10

3、只，100mg·kg-1·d-1)、吡格列酮治療組(PIO組，n=10只，10 mg·kg-1·d-1)和PDTC聯(lián)合PIO治療組(PDTC+PIO組，n=10只，分別100mg·kg-1·d-1與10mg·kg-1·d-1)，上述藥物均溶于蒸餾水等量灌胃，NC組和DM組給予等量蒸餾水灌胃。治療8周后處死大鼠。處死前一日收集24h尿，檢測尿24h蛋白(24hUP)定量；下腔靜脈取血檢測空腹血糖(FPG)、膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)

4、、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、丙二醛(MDA)、血清超氧化物歧化酶(SOD)活力。取雙腎稱重計算腎重指數(shù)(腎重/體重，KI)；10％福爾馬林固定，石蠟切片，PASM染色觀察腎小球細胞外基質(zhì)(ECM)堆積;采用免疫組化、免疫印跡(Westerm-blot)方法檢測腎臟組織中NF-κB p65、MCP-1蛋白的表達。數(shù)據(jù)運用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析。
　　

5、 結(jié)果：
　　 實驗結(jié)束時，2型糖尿病成模大鼠均表現(xiàn)早期糖尿病腎病典型變化。
　　 與NC組比較，DM組及三個治療組FPG、TC、TG、LDL-C、BUN、Scr、血清MDA、24hUP、腎重、KI、腎小球細胞外基質(zhì)(ECM)堆積指數(shù)明顯增高(P＜0.01);體重、HDL-C水平、SOD活力明顯降低(P＜0.01)；腎臟組織NF-κBp65、MCP-1表達水平明顯增高(P＜0.01)。
　　 與DM組比較，三個治

6、療組FPG、TC、TG、LDL-C、BUN、Scr、血清MDA、24hUP、腎重、KI、腎小球ECM堆積指數(shù)明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)；體重、HDL-C水平、SOD活力明顯增加(P＜0.01);腎臟組織NF-κB p65、MCP-1表達水平明顯降低(P＜0.01)。
　　 與PDTC組及PIO組比較，PDTC+PIO組上述各指標進一步改善；腎組織NF-κB p65、MCP-1表達水平進一步下降，腎臟病理及功能改善更明

7、顯(除了PDTC+PIO組血糖與PIO組比，P＞0.05；其它指標相比，均P＜0.01)。
　　 各組大鼠24hUP、血清BUN、Scr、腎小球ECM堆積指數(shù)等均與NF-κB p65、MCP-1表達水平呈正相關(guān)(P＜0.01)MCP-1表達水平與NF-κB p65表達水平呈正相關(guān)(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 (1)2型糖尿病大鼠出現(xiàn)持續(xù)蛋白尿、典型糖尿病腎病的早期病理改變，并與NF-κB p65、MCP

8、-1表達呈正相關(guān)；
　　 (2)PDTC和PIO藥物干預(yù)后，均可改善糖脂代謝，降低尿蛋白；下調(diào)腎臟組織NF-κB p65、MCP-1的表達，改善腎臟病理及腎功能，延緩糖尿病腎病的進展。說明PDTC和PIO對糖尿病大鼠腎臟均有保護作用；PDTC和PIO聯(lián)用較單藥效果更好。
　　 (3)PDTC和PIO的作用機制與減輕氧化應(yīng)激、抑制NF-κB p65活性，從而下調(diào)MCP-1的過度表達，減少單核巨噬細胞在腎臟組織的浸潤，減輕腎