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文檔簡(jiǎn)介
1、研究背景:
針灸是祖國(guó)醫(yī)學(xué)的重要組成部分,在治療各種病痛方面療效顯著。臨床上利用針灸的鎮(zhèn)痛作用,可有效地進(jìn)行急性痛、慢性痛、癌痛等的治療,并開展了多種多樣的外科手術(shù)和術(shù)后疼痛的治療。甲狀腺于術(shù)是針刺麻醉最佳適應(yīng)證之一。術(shù)后痛是急性疼痛的一種表現(xiàn)形式,臨床上,針刺能夠緩解多種術(shù)后切口痛,減輕病人痛苦,促進(jìn)康復(fù),減少術(shù)后惡心嘔吐,改善于術(shù)預(yù)后。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證明,電針可減輕大鼠足底切口痛行為反應(yīng)。但是,針刺緩解頸部術(shù)后切口痛的作用機(jī)制
2、還不清楚,研究報(bào)道鮮見(jiàn)。脊髓是痛覺(jué)信息進(jìn)入中樞后的第一級(jí)整合中樞,脊髓背角,尤其是背角淺層,含有種類繁多的神經(jīng)活性物質(zhì)和受體,在脊髓水甲的痛信息傳遞、整合及痛覺(jué)調(diào)制中扮演著重要的角色。我們前期的研究工作證明:甲狀腺區(qū)手術(shù)切口后4-6小時(shí)的疼痛反應(yīng),電針?lè)鐾?、合?內(nèi)關(guān)穴區(qū)對(duì)具有較佳的鎮(zhèn)痛效應(yīng);該鎮(zhèn)痛效果與其下調(diào)頸段脊髓背的致痛物質(zhì)P物質(zhì)(SP)及其受體NK1基因及蛋白的表達(dá),降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)蛋白的表達(dá),調(diào)節(jié)鎮(zhèn)痛物質(zhì)5羥色胺受體
3、亞型(5-HT1AR、5-HT2AR)基因、蛋白的活動(dòng)實(shí)現(xiàn)的。因此,本研究擬進(jìn)一步觀察頸部切口痛大鼠疼痛行為變化的規(guī)律,觀察電針“扶突”穴區(qū)等對(duì)該切口痛產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效應(yīng)的情況下,頸段脊髓內(nèi)興奮性氨基酸受體N-甲基-D-天冬氨酸受體業(yè)型2B(N-methyl D-aspartate receptor subtype2B,NMDAR2B)、代謝型谷氨酸受體業(yè)型5(metabotropic glutamate receptor subtype5,
4、mGluR5)、抑制性氨基酸γ-氨基丁酸B1受體(γ-aminobutyric acid B1receptor,GABAB1R)、細(xì)胞內(nèi)腺苷-3’,5’-環(huán)化-磷酸(cyclic Adenosinemonophosphate,cAMP)/促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated proteinkinases,MAPK)/環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(cAMP-response element bindingprotein,
5、CREB)信號(hào)通路活動(dòng)(表達(dá))的變化,探討電針緩解頸部切口痛的脊髓機(jī)制,為臨床針麻行甲狀腺手術(shù)、針刺治療術(shù)后痛提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
材料與方法:
雄性Wistar大鼠122只,隨機(jī)分為正常對(duì)照(n=22),模型組(n=34),扶突穴組(n=22),合谷-內(nèi)關(guān)組(n=22),足三里一陽(yáng)陵泉組(n=22)。異氟烷麻醉下,于大鼠頸部做一長(zhǎng)約1.5cm縱形切口,復(fù)制切口疼痛模型。各治療組在造模4 h、24 h、48 h后給予電針上
6、述諸穴區(qū)各30 min(2/15Hz,15min,1mA;15min,2mA),用熱輻射法分別在術(shù)前、術(shù)后4h、24h、48h電針前后照射大鼠頸部/切口引起的躲避潛伏期作為衡量動(dòng)物痛反應(yīng)的閾值(每組8例)。在麻醉狀態(tài)下,取C1~C4段脊髓背側(cè)部分的組織液氮研磨提取RNA和蛋白,用熒光定量RT-PCR法和Western blot方法檢測(cè)大鼠頸部C1~C4段脊髓背側(cè)等區(qū)域組織細(xì)胞膜興奮性氨基酸和抑制性氨基酸受體基因及蛋白(mGluR5 mR
7、NA、mGluR5蛋白、NMDAR2B蛋白和GABAB1R蛋白)水平的表達(dá)變化及細(xì)胞內(nèi)激酶/核轉(zhuǎn)錄因子mRNA水平和蛋白水平(cAMP mRNA/MAPK mRNA/CREB mRNA和CREB蛋白、p-CREB蛋白)的變化趨勢(shì)檢測(cè)觀察,更深入地分析電針鎮(zhèn)痛行甲狀腺手術(shù)的分子生物學(xué)機(jī)制。其中RT-PCR實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)相應(yīng)物質(zhì)基因水平的變化(每組樣品8例),Western blot實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)相應(yīng)物質(zhì)蛋白水平的變化(每組樣品6例)。
8、 結(jié)果:
1電針?lè)鐾谎ǖ染徑忸i部切口創(chuàng)傷大鼠痛行為反應(yīng)的效應(yīng)
與頸部切口術(shù)前痛閾(模型組17.80±1.52 sec,扶突穴組17.88±1.89 sec,合谷-內(nèi)關(guān)組18.77±3.22 sec,足三里陽(yáng)陵泉組17.63±2.18 sec)比較,甲狀腺區(qū)切口術(shù)后模型組動(dòng)物的躲避潛伏期(模型組11.29±0.99sec,扶突穴組11.45±2.02sec,合谷-內(nèi)關(guān)組12.01±1.38sec,足三里陽(yáng)陵泉組11.
9、2±1.72sec)明顯縮短(P<0.05),痛閾降低。與同時(shí)期模型組比(術(shù)后4 h:11.12±1.00sec,術(shù)后1 d:11.64±0.97sec,術(shù)后2 d:11.68±1.40sec),電針?lè)鐾谎?16.7±1.97sec,17.76±1.94sec,16.98±1.84sec)、合谷-內(nèi)關(guān)組(17.3±2.1sec,18.15±1.28sec,17.91±2.31sec)動(dòng)物的痛閾明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);而
10、電針足三里-陽(yáng)陵泉組的痛閾值(12.15±2.53sec,11.98±1.72sec,12.18±1.79sec)未見(jiàn)明顯變化(P>0.05)。
2電針對(duì)術(shù)后48h頸部切口痛大鼠頸髓GABA/Glu受體表達(dá)的影響
熒光定量Real Time-PCR結(jié)果顯示,頸部切口術(shù)后,與正常對(duì)照組比較(0.56±0.04),模型組動(dòng)物脊髓背側(cè)mGluR5 mRNA表達(dá)量(1.01±0.01)顯著增高(P<0.05)。與模型組比較,
11、電針?lè)鐾谎ńMmGluR5 mRNA的表達(dá)量(0.83±0.17)輕度降低(P>0.05),但是比電針合谷-內(nèi)關(guān)組(1.04±0.13)、足三里-陽(yáng)陵泉組(1.03±0.05)作用明顯(P<0.05);電針足三里-陽(yáng)陵泉穴,合谷-內(nèi)關(guān)組頸髓背側(cè)mGluR mRNA的表達(dá)量變化不大(P>0.05)。
Western blot結(jié)果顯示:頸部切口術(shù)后,模型組mGluR5蛋白表達(dá)量(1.43±0.04)比正常組(0.98±0.04)明顯
12、增多(P<0.05)。電針各組mGluR蛋白的表達(dá)量(1.22±0.04,1.06±0.04,1.14±0.04)均明顯降低(P<0.05)。模型組NMDAR2B蛋白表達(dá)量(0.46±0.04)比正常對(duì)照組(0.44±0.04)增多,但未達(dá)顯著差異(P>0.05);電針各組基本沒(méi)明顯變化(0.41±0.03,0.45±0.04,0.43±0.05),差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。
頸部切口術(shù)后,與正常對(duì)照組(0.64±
13、0.15)比較,模型組GABAB1R蛋白表達(dá)量(0.56±0.01)降低,針刺扶突穴組GABAB1R蛋白表達(dá)量(0.61±0.03)增多,針刺合谷-內(nèi)關(guān)組,足三里-陽(yáng)陵泉組(0.54±0.04,0.56±0.05)基本沒(méi)變化,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。
3電針對(duì)術(shù)后48h頸部切口痛大鼠頸髓背角細(xì)胞內(nèi)cAMP/MAPK/CREB信號(hào)通路活動(dòng)的影響
術(shù)后,與正常組比(0.21±0.06,0.54±0.11),
14、模型組頸髓背側(cè)cAMP mRNA、CREBmRNA表達(dá)量(0.53±0.11,3.32±0.68)均明顯升高(P<0.05)。與模型組比,電針“扶突”后cAMP mRNA、CREB mRNA表達(dá)量(0.13±0.02,0.39±0.01)顯著降低(P<0.05),而電針“合谷-內(nèi)關(guān)穴”(0.47±0.06,2.97±0.57)以及“足三里-陽(yáng)陵泉”(0.51±0.09,3.71±0.64)的效果不明顯(P>0.05)。電針“扶突穴”下調(diào)
15、cAMP、CREB基因表達(dá)的作用,明顯優(yōu)于電針“合谷-內(nèi)關(guān)穴”以及“足三里-陽(yáng)陵泉”穴區(qū)(P<0.05)。與正常組(1.38±0.1)比較,模型組頸髓背角MAPK mRNA表達(dá)量(1.72±0.36)增多,但未達(dá)顯著差異(P>0.05);針刺各組(1.68±0.17,1.77±0.4,1.91±0.33)基本沒(méi)明顯變化,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。
術(shù)后,模型組CREB蛋白表達(dá)量(0.65±0.16)比正常組(0.6
16、4±0.03)增多,針刺扶突穴組CREB蛋白表達(dá)量(0.54±0.13)降低,但未達(dá)顯著差異(P>0.05);針刺合谷-內(nèi)關(guān)組,足三里-陽(yáng)陵泉組CREB蛋白表達(dá)量(0.43±0.04,0.33±0.03)明顯降低(P<0.05)。與正常對(duì)照組(0.31±0.02)比較,模型組p-CREB蛋白表達(dá)量(0.42±0.03)顯著增高(P<0.05)。與模型組比較,電針?lè)鐾谎ńM,合谷-內(nèi)關(guān)組p-CREB蛋白表達(dá)量(0.31±0.05,0.29±
17、0.02)均明顯降低(P<0.05),針刺足三里-陽(yáng)陵泉組p-CREB蛋白的表達(dá)量(0.34±0.05)無(wú)明顯變化(P>0.05)。
結(jié)論:
1大鼠頸部切口創(chuàng)傷可引起的明顯的痛反應(yīng),使大鼠痛閾降低,并可持續(xù)約5天;電針?lè)鐾?、合?內(nèi)關(guān)穴可明顯抑制切口痛大鼠的疼痛反應(yīng);
2電針?lè)鐾谎▍^(qū)產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效應(yīng)時(shí)可明顯抑制切口痛引起的脊髓頸段背側(cè)區(qū)興奮性氨基酸受體mGluR5 mRNA及mGluR5蛋白的表達(dá)顯著升高,輕度
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