力達(dá)霉素抗腫瘤活性的實驗研究.pdf

1、力達(dá)霉素(Lidamycin，LDM)是我所用精原細(xì)胞法從湖北省潛江縣的土壤中分離得到的一株放線菌Streptomyces globisiporus C—1027的代謝產(chǎn)物中篩選出來的一個新的烯二炔類的抗腫瘤抗生素[1]。
　　 力達(dá)霉素是由一個發(fā)色團(tuán)和一個酸性蛋白構(gòu)成的烯二炔類的新化合物。蛋白部分由110個氨基酸組成，分子量為10506Da，發(fā)色團(tuán)含有一個九元環(huán)烯二炔核心結(jié)構(gòu)，分子量為843Da。發(fā)色團(tuán)為力達(dá)霉素的活性部分，蛋

2、白部分起保護(hù)發(fā)色團(tuán)的作用。力達(dá)霉素對腫瘤細(xì)胞有強(qiáng)烈的殺傷作用，按克隆生成測定的IC50(50％克隆抑制濃度)進(jìn)行比較，力達(dá)霉素的作用比阿霉素、甲氨蝶呤、順鉑等強(qiáng)6-7個數(shù)量級[2]。
　　 1.力達(dá)霉素的體內(nèi)抗腫瘤實驗研究
　　 力達(dá)霉素在體外有強(qiáng)的細(xì)胞殺傷作用，在體內(nèi)能顯著抑制腫瘤的生長。本文研究的是力達(dá)霉素經(jīng)靜脈給藥對多種小鼠移植性腫瘤和裸鼠移植的人腫瘤的抑制作用。
　　 1)力達(dá)霉素不同劑量不同次數(shù)給藥對小

3、鼠移植性肝癌22的抑制作用：每只小鼠給藥總量為2ug和lug，分一次和多次給予，14天處理。結(jié)果顯示：力達(dá)霉素對小鼠肝癌22有強(qiáng)的抑制作用，且呈劑量依賴關(guān)系。小鼠體重均有所增加，證明給藥方式適當(dāng)。當(dāng)每只小鼠給藥總量為0.05mg/kg時，無論分1次、2次或多次給藥時，其抑瘤率相當(dāng)，P值大于0.05，沒有顯著差異，證明在可耐受劑量下力達(dá)霉素單給藥即可達(dá)到良好的抑瘤效果。
　　 2)力達(dá)霉素對小鼠移植性腫瘤肝癌22的抑制作用：力達(dá)霉

4、素分24小時后給藥和每周給1次，共2次(第1，7天)，14天處理。力達(dá)霉素對小鼠移植性腫瘤肉瘤180的抑制作用：力達(dá)霉素分別24小時后給藥和每周給1次，共2次(第l，7天)，14天處理。力達(dá)霉素對小鼠移植性腫瘤宮頸癌14的抑制作用：力達(dá)霉素24小時后給藥，14天處理。結(jié)果顯示：力達(dá)霉素對小鼠肝癌22，肉瘤180和宮頸癌14均有強(qiáng)的抑制作用，且呈劑量依賴關(guān)系。力達(dá)霉素最大耐受劑量總量不超過0.4 mg/kg。相同劑量給藥一次與給藥兩次，療

5、效沒有顯著差異。力達(dá)霉素與絲裂霉素等毒劑量下，力達(dá)霉素對小鼠移植性腫瘤的療效均高于絲裂霉素。小鼠雌雄兼用，沒有性別差異。
　　 3)力達(dá)霉素對人移植性腫瘤肺癌PG的抑制作用：把瘤組織制成2×2mm小塊接種于裸鼠腋窩皮下，給藥2次(第3，6天或第3，10天)，第15天處理或第21天處理，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。力達(dá)霉素對人移植性腫瘤肝癌Bel—7402的抑制作用：把瘤組織制成2×2mm小塊接種于裸鼠腋窩皮下，給藥2次(第3，6天或第3，10

6、天)，第15天處理或第21天處理，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果顯示：力達(dá)霉素對人移植性腫瘤肺癌PG和人移植性腫瘤肺癌Bel—7402均有抑制作用，且呈劑量依賴關(guān)系。相同劑量給藥一次與給藥兩次，療效沒有顯著差異。力達(dá)霉素與絲裂霉素等毒劑量下，力達(dá)霉素對人移植性腫瘤的療效均高于絲裂霉素。
　　 以上結(jié)果表明，力達(dá)霉素單獨給藥顯示對多種小鼠和人的移植性腫瘤有強(qiáng)的生長抑制作用，且呈劑量依賴關(guān)系。力達(dá)霉素與絲裂霉素等毒劑量下，力達(dá)霉素對多種小鼠和人

7、的移植性腫瘤的療效均高于絲裂霉素。
　　 2.力達(dá)霉素與多種抗腫瘤藥物的聯(lián)合應(yīng)用
　　 采用克隆形成法觀察力達(dá)霉素與化療藥物5—氟尿嘧啶、阿霉素、紫杉醇、順鉑和諾維本在體外聯(lián)合應(yīng)用對人移植性腫瘤腸癌HCT—1116、人乳腺癌MCF—7和人肺癌H460細(xì)胞的細(xì)胞殺傷作用，體外實驗結(jié)果表明LDM分別與CDDP、NVB、5—Fu、ADM、TAX體外聯(lián)用的CDI值均小于0.7，顯示有顯著協(xié)同作用。1)用H460細(xì)胞進(jìn)行克隆形成測

8、定結(jié)果顯示，單獨給藥LDM的IC50為1.6×10-6μg/ml。LDM7.8×10-7μg/ml與NVB6.25×10-6μg/ml合并時CDI值為0.2，協(xié)同效應(yīng)達(dá)到最高，顯示兩藥有顯著協(xié)同作用。2)用HCT—116細(xì)胞進(jìn)行克隆形成測定結(jié)果顯示，單獨給藥LDM的IC50為1.4×10-6μg/ml。LDM3.1×10-6μg/ml與CDDP0.025μg/ml合并時CDI值為0.66，顯示兩藥有顯著協(xié)同作用；LDM7.8×10-7μ

9、g/ml與5Fu0.2μg/ml合并時CDI值為0.27，顯示兩藥有顯著協(xié)同作用。3)用MCF—7細(xì)胞進(jìn)行克隆形成測定結(jié)果顯示，單獨給藥LDM的IC50為2.2×10-6μg/ml。LDM7.8×10-7μg/ml與ADM0.0025μg/ml合并時CDI值為0.37；LDM7.8×10-7μg/ml與TAX0.001μg/ml合并時CDI值為0.64，LDM分別與ADM和TAX有顯著協(xié)同作用。
　　 力達(dá)霉素分別與化療藥物5—

10、氟尿嘧啶、阿霉素、紫杉醇、順鉑和諾維本在體內(nèi)的聯(lián)合應(yīng)用對小鼠移植性腫瘤肝癌22的抑制作用：取小鼠肝癌H22細(xì)胞腹腔積液，用生理鹽水制成750萬細(xì)胞每毫升細(xì)胞懸液，每只小鼠接種腫瘤細(xì)胞數(shù)量為1.5×106，給藥前將動物隨機(jī)分組(每組10只)，力達(dá)霉素在接種腫瘤后靜脈給藥；陽性抗腫瘤藥靜脈或腹腔給藥，第14天處理，記錄動物體重和瘤重，計算抑瘤率和CDI，CDI=AB/(A×B)，AB為兩藥聯(lián)合組與對照組瘤重的比值；A或B是藥物單獨給藥組與對

11、照組瘤重的比值。結(jié)果顯示力達(dá)霉素0.05mg/kg與5氟尿嘧啶100mg/kg聯(lián)合抑瘤率為88％，CDI值為0.92。力達(dá)霉素0.1mg/kg與紫杉醇35mg/kg聯(lián)合抑瘤率為80％，CDI值為0.89。紫杉醇35mg/kg與力達(dá)霉素0.05mg/kg聯(lián)合抑瘤率為55％，CDI值為0.90。諾維本/順鉑4/4 mg/kg與力達(dá)霉素0.05mg/kg聯(lián)合抑瘤率為85％，CDI值為0.96。健擇100mg/kg與力達(dá)霉素0.025mg/kg

12、聯(lián)合抑瘤率為78％，CDI值為1.02。阿霉素35mg/kg與力達(dá)霉素0.05mg/kg聯(lián)合抑瘤率為77％，CDI值為0.85。
　　 本部分實驗結(jié)果顯示聯(lián)合用藥有效抑制腫瘤生長。結(jié)果表明：力達(dá)霉素與不同抗腫瘤藥的聯(lián)合在體外對多種腫瘤細(xì)胞的殺傷作用及在體內(nèi)對腫瘤生長抑制作用均具有增加療效和協(xié)同作用。
　　 3.力達(dá)霉素與地塞米松的體內(nèi)對小鼠移植性肝癌22的影響
　　 力達(dá)霉素靜脈注射給藥，地塞米松腹腔注射給藥，對