冠心病中醫(yī)辨證分型的代謝組學(xué)初步研究.pdf

1、冠心病已經(jīng)成為危害全人類健康的常見病及多發(fā)病，并且發(fā)病年齡越來越年輕?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)在冠心病病理生理、診療技術(shù)等方面的突飛猛進(jìn)，給中醫(yī)及中西醫(yī)結(jié)合診治心血管病的傳統(tǒng)診療方法帶來了極大的挑戰(zhàn)。盡管近年來中西醫(yī)結(jié)合診治冠心病研究取得了較大進(jìn)展，但仍存在許多問題和難點(diǎn)。代謝組學(xué)是一門在新陳代謝的動(dòng)態(tài)進(jìn)程中，系統(tǒng)研究代謝產(chǎn)物的變化規(guī)律，揭示機(jī)體生命活動(dòng)代謝本質(zhì)的科學(xué)。本研究首次運(yùn)用基于GC-TOF/MS的代謝組學(xué)技術(shù)平臺(tái)進(jìn)行冠心病中醫(yī)辯證分型的代謝組

2、學(xué)研究。通過調(diào)查冠心病患者臨床資料及其中醫(yī)證候，并檢測血清代謝組學(xué)變化規(guī)律，探討冠心病人與健康人之間、冠心病各中醫(yī)證型之間的代謝組學(xué)差異，為冠心病的中醫(yī)證型客觀化研究提供參考依據(jù)，探討中醫(yī)證型的分子生物學(xué)機(jī)理。 1.代謝組學(xué)的條件及方法的建立 目的：選擇最佳的檢測條件，建立代謝組學(xué)研究方法。 方法：安捷倫GC6980 GC與PegasusⅢ TOFMS串聯(lián)連接。所選擇最佳的GC-TOF/MS操作條件是：進(jìn)樣量1μ

3、l，采用不分流進(jìn)樣模式；氦氣是載氣，恒流速度是1 ml/min，采用程序升溫模式；進(jìn)樣口溫度：250℃；清洗時(shí)間和流速：1min，20ml/min；傳輸管溫度：250℃；離子源溫度：200℃；離子源電壓和電流：-70 eV，3.0 mA；MS采用全掃描方式進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，掃描范圍是m/z50-800，速度是20spectra/s，有160 s的溶劑延遲，檢測電壓是-1650v。 結(jié)果：通過對血清提取和衍生化，用GC/MS分析疾病組

4、和健康對照組的樣品。得到每個(gè)個(gè)體的數(shù)據(jù)和GC/MS譜圖信息，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)都對應(yīng)著荷質(zhì)比從50到800質(zhì)譜信息，每個(gè)保留時(shí)間點(diǎn)所示峰強(qiáng)度是所有總離子之和，一個(gè)可見峰可能含有數(shù)個(gè)化合物信息。應(yīng)用PCA和PLS對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，得到樣本分布散點(diǎn)圖并進(jìn)行組間分析。將具有顯著意義的組份輸入計(jì)算機(jī)，在建立的化合物庫里查詢對應(yīng)化合物，發(fā)現(xiàn)有關(guān)化合物。 結(jié)論：運(yùn)用以上方法得到的樣本散點(diǎn)圖，可以有效區(qū)分疾病組和健康對照組。 2.異丙腎上腺

5、素誘導(dǎo)大鼠心肌缺血損傷的代謝組學(xué)研究 目的：進(jìn)行心肌缺血中醫(yī)證大鼠模型的代謝組學(xué)研究，從而探索和揭示中醫(yī)“病證”的發(fā)生發(fā)展內(nèi)在機(jī)制。 方法：以異丙腎上腺素結(jié)合腎上腺素加冰水刺激，以及異丙腎上腺素結(jié)合小站臺(tái)水環(huán)境法剝奪睡眠分別建立心肌缺血心血淤阻證和心肌缺血?dú)怅巸商撟C大鼠模型，運(yùn)用基于GC-TOF/MS檢測技術(shù)的代謝組學(xué)方法分析血清中的內(nèi)源性小分子代謝物。 結(jié)果：兩種中醫(yī)病證型和正常大鼠三組間GC代謝譜圖存在明顯差

6、異，數(shù)據(jù)處理和模式識別后，樣品分布散點(diǎn)圖中各組區(qū)分清晰。與正常大鼠相比，模型大鼠血清乳酸、羥脯氨酸、蘇丁糖酸、檸檬酸、葡萄糖等化合物的相對含量均發(fā)生了顯著變化，兩種“病證”大鼠間血清纈氨酸、蘇氨酸、羥脯氨酸、呋喃半乳糖、2-羥基丁酸、3-羥基丁酸、賴氨酸等化合物的相對含量存在顯著差異，提示這些化合物可能是區(qū)分兩種中醫(yī)病證的生物標(biāo)志物。通過追溯代謝通路發(fā)現(xiàn)這些代謝物的變化與檸檬酸循環(huán)、糖代謝、氨基酸代謝等的異常密切相關(guān)。 結(jié)論：運(yùn)

7、用代謝組學(xué)研究技術(shù)可以從整體上對心肌缺血中醫(yī)證型動(dòng)物模型進(jìn)行綜合評價(jià)，并為揭示它們生物學(xué)本質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)。 3.冠心病中醫(yī)辨證分型與臨床指標(biāo)相關(guān)性研究 目的：探討冠心?。–HD）常見中醫(yī)證型與冠狀動(dòng)脈造影（CAG）及血脂水平等相關(guān)臨床指標(biāo)之間的關(guān)系。 方法：對96例冠脈造影確診為CHD的患者進(jìn)行同步中醫(yī)辨證分型，并檢測其血脂水平，再將以上結(jié)果作對照。 結(jié)果：CHD患者中醫(yī)證型中痰阻心脈證比例最大，占37.

8、50％，其次為氣虛血瘀證，占21.88％，陽氣虛衰證最少，僅占2.08％，其余證型分布較均勻，氣陰兩虛證、氣滯血瘀證以及心血瘀阻證分別占16.67％、11.46％和10.42％.氣虛血瘀證、痰阻心脈證和心血瘀阻證多為三支病變，氣陰兩虛證多為雙支病變，氣滯血瘀證則多發(fā)單支病變。氣虛血瘀證和陽氣虛衰證平均狹窄程度最重，分別為81.1％和85.0％，氣滯血瘀證病變程度最輕，為67.1％，且與氣虛血瘀證有顯著差別。各個(gè)證型的甘油三酯（TG）均顯

9、著高于正常對照組，其余血脂、脂蛋白水平基本正常。 結(jié)論：隨冠脈病變部位及程度不同，CHD的證型分布各有特點(diǎn)，CAG結(jié)果及血脂水平與中醫(yī)證型有一定的相關(guān)性。 4.冠心病中醫(yī)辨證分型的代謝組學(xué)研究 目的：將傳統(tǒng)中醫(yī)辨證方法同現(xiàn)代系統(tǒng)生物學(xué)理論相結(jié)合，探討冠心病中醫(yī)辨證分型與基于GC-TOF/MS的血清代謝組學(xué)的關(guān)系。 方法：參照《中藥（新藥）臨床研究指導(dǎo)原則》，收集90例高血壓病患者以及29例健康人。選取的冠

10、心病患者辨證分為痰阻心脈、氣陰兩虛、氣虛血瘀及氣滯血瘀四型。應(yīng)用GC-TOF/MS測定健康人及不同中醫(yī)證型的冠心病患者血清內(nèi)源性代謝物，并用偏最小乘方分析法（PLS-DA）分析其代謝譜。 結(jié)果：PLS-DA分析的結(jié)果表明：該方法不僅可以有效區(qū)分疾病組和健康對照組，且男性患者中氣虛血淤型和痰阻心脈型可明顯區(qū)分開來；女性患者中氣虛血淤型、痰阻心脈型和氣陰兩虛型冠心病患者間可明顯區(qū)分開來。 結(jié)論：冠心病患者與健康人、以及冠心病