胃癌患者Th17-Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子及相關(guān)細(xì)胞因子的檢測(cè)與臨床意義.pdf

1、目的： 檢測(cè)胃癌患者Th17主要轉(zhuǎn)錄因子與Treg細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子及Th17/Treg相關(guān)的細(xì)胞因子的表達(dá)水平，分析Th17/Treg在胃癌患者的變化情況，觀察其與臨床病理組織分型之間的關(guān)系，并初步探討其可能機(jī)制。 方法： 1)分離健康志愿者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，PMA+Ionomycin刺激培養(yǎng)6h，采用PCR擴(kuò)增目的基因序列，T—A克隆，構(gòu)建目的基因定量PCR檢測(cè)用質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品。 2)70例胃

2、癌患者，40例健康志愿者外周血標(biāo)本均來(lái)自江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院．鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院，所有患者標(biāo)本均記錄了性別、年齡、腫瘤大小、位置、病理組織分型資料。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(QRT—PCR)技術(shù)，檢測(cè)PBMC中Th17細(xì)胞主要轉(zhuǎn)錄因子RORγt，Treg細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子FoxP3及Th17/Treg細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IL-6、IL-1β、TGF—βmRNA的表達(dá)水平； 3)采用直線相關(guān)分析方法對(duì)FoxP3與RORγt

3、、TGF—βmRNA表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析； 4)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)胃癌患者血漿IL-23、IL-10濃度。 結(jié)果： 1．轉(zhuǎn)錄因子分析結(jié)果1)與健康對(duì)照組比較，胃癌患者組PBMC中Th17細(xì)胞的主要轉(zhuǎn)錄因子RORγtmRNA表達(dá)水平，Treg細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子FoxP3mRNA表達(dá)水平均顯著升高(P＜0.05)； 2)FoxP3mRNA與RORγtmRNA表達(dá)水平的比值，在胃癌轉(zhuǎn)

4、移組較健康組明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而胃癌未轉(zhuǎn)移組與健康組相比無(wú)明顯差異(P＞0.05)。 3)FoxP3mRNA與RORγtmRNA表達(dá)水平的比值與胃癌病理組織分型的關(guān)系顯示，在低分化組比值明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)4)相關(guān)性分析表明，胃癌轉(zhuǎn)移組患者FoxP3與RORγtmRNA表達(dá)水平無(wú)明顯相關(guān)性(R2=0.1520)。 2．相關(guān)細(xì)胞因子的分析1)與健康對(duì)照組比較，胃癌患者組外周血單

5、個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中Th17細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子IL-17、IL-6、IL-1βmRNA表達(dá)水平明顯升高(P＜0.05)，Treg細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子TGF—βmRNA表達(dá)水平顯著升高(P＜0.05)；在胃癌患者，轉(zhuǎn)移組TGF—βmRNA較未轉(zhuǎn)移組明顯升高(P＜0.05)，而IL-17、IL-6、IL-1βmRNA表達(dá)水平在兩組間未見(jiàn)明顯差異(P＞0.05)。 2)Th17/Treg細(xì)胞因子與臨床病理組織分型的關(guān)系顯示：TGF—β

6、mRNA在低分化組呈高水平表達(dá)(P＜0.05)，而IL-17、IL-6、IL-1βmRNA在各分化組表達(dá)水平無(wú)明顯差異(P＞0.05)。 3)TGF—βmRNA與FoxP3mRNA表達(dá)呈明顯正相關(guān)(R2=6861)。 4)ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，胃癌患者血漿IL-23、IL-10呈高表達(dá)，與健康對(duì)照組差異明顯(P＜0.05)；并且IL-10mRNA表達(dá)水平胃癌未轉(zhuǎn)移組與轉(zhuǎn)移組之間差異顯著(P＜0.01)；而IL-23在兩