人參皂甙Rg3對人食管癌EC-9706細(xì)胞及內(nèi)源性VEGF的影響.pdf

1、目的：惡性腫瘤是目前危害全球人類健康的主要疾病,其發(fā)病率和死亡率都呈明顯的逐年增加的趨勢。在眾多的惡性腫瘤中,食管癌是最常見的一種,而我國是世界上食管癌發(fā)病率和死亡率最高的國家。在我國每年死于腫瘤的人群中,胃癌居于首位,而食管癌將近占到全部死亡人數(shù)的四分之一,僅僅次于胃癌而居于第2位。食管癌對我國國民的危害不僅僅是奪去了患者的生命,還在于它同時(shí)給患者帶來的嚴(yán)重的軀體痛苦,巨大的精神壓力和很重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此,對于我們醫(yī)務(wù)工作者來說,竭盡

2、全力研究和提高食管癌的治療水平是當(dāng)務(wù)之急。目前,食管癌的治療方法主要包括手術(shù)、化療、放療和生物免疫治療等多種措施,但一半以上的食管癌患者就診時(shí)已屬晚期,手術(shù)及放療難以達(dá)到滿意的效果所以,對降低食管癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的機(jī)制和藥物的研究及新的治療策略的探索具有重大的意義。近幾年來,中草藥因其能全面調(diào)理且不良作用小的特點(diǎn)越來越受到人們的重視。新近開發(fā)的抗腫瘤中草藥中,人參便是其中之一。人參是我國傳統(tǒng)中藥中的珍品,目前的研究發(fā)現(xiàn)除了具有延緩衰老、增加

3、智力、增加機(jī)體免疫力等重要藥效外其抗腫瘤的作用也逐漸被人們所發(fā)現(xiàn)。近年來,多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),人參皂甙具有抑制腫瘤細(xì)胞生長、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移及誘導(dǎo)惡性細(xì)胞分化等作用而受到人們的廣泛關(guān)注。尤其以人參皂甙Rg3的抗腫瘤作用最為明顯。20(R)-人參皂甙Rg3(Rg3)是從紅參中微量提取出的一種有效單體,它與20(S)-人參皂甙Rg3是同型異構(gòu)體,它的降解產(chǎn)物是20(R)-人參皂甙Rh2。雖然三者相似,但以20(R)-人參皂甙Rg

4、3的抗腫瘤作用最為明顯。本研究主要通過MTT法、流式細(xì)胞術(shù)及免疫細(xì)胞化學(xué)等方法檢測中藥20(R)-人參皂甙Rg3(Rg3)對人食管癌EC-9706細(xì)胞增殖、凋亡、周期及其內(nèi)源性VEGF的影響,從而探討20(R)-人參皂甙Rg3(Rg3)抑制該細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移潛能和抑制腫瘤血管生成的可能機(jī)制,為20(R)-人參皂甙Rg3(Rg3)臨床治療食管癌提供新的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞株EC-9706,采用3個(gè)藥物濃度(

5、Rg3)(50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l)和2個(gè)時(shí)間點(diǎn)(24h和48h)對其進(jìn)行干預(yù),主要通過光學(xué)顯微鏡觀察3個(gè)濃度Rg3作用的EC-9706細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變;MTT法檢測3個(gè)濃度Rg3對EC-9706細(xì)胞增殖的影響;流式細(xì)胞儀觀察3個(gè)濃度Rg3對EC-9706細(xì)胞周期和凋亡的影響;免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測3個(gè)濃度Rg3對腫瘤細(xì)胞內(nèi)源性VEGF的影響。
　　結(jié)果：光學(xué)顯微鏡下觀察3個(gè)濃度Rg3作用后,EC-9

6、706細(xì)胞失去腫瘤細(xì)胞的多角性,不規(guī)則性,細(xì)胞邊緣變鈍、變圓,細(xì)胞折光性下降,變暗,漂浮的死細(xì)胞逐漸增多;MTT法檢測顯示3個(gè)濃度的20(R)-人參皂甙Rg3(Rg3)對人食管癌細(xì)胞株EC-9706的增殖均有明顯的抑制作用,且呈明顯的時(shí)間依賴性和劑量依賴性,24 h的IC50為131.7μmol/l,48 h的IC50為81μmol/l。流式細(xì)胞術(shù)檢測表明3個(gè)濃度的Rg3作用該細(xì)胞48h后能誘導(dǎo)其發(fā)生細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞周期:Rg3作用4

7、8h后S期的細(xì)胞比率增加,G0/G1的細(xì)胞比率下降,將此腫瘤細(xì)胞阻滯于S期;Rg3能使此細(xì)胞產(chǎn)生明顯的凋亡,凋亡率為分別為8.1％、9.7％、13.8％,而對照組無凋亡。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的結(jié)果證實(shí),Rg3能明顯的抑制此腫瘤細(xì)胞內(nèi)源性VEGF的表達(dá),且抑制作用隨藥物濃度的增加而增加。
　　結(jié)論：適當(dāng)濃度的20(R)-人參皂甙Rg3(Rg3)作用人食管癌細(xì)胞株EC-9706后一定時(shí)間,可明顯抑制此細(xì)胞的增殖,且抑制作用呈明顯的時(shí)間和劑