人臍帶間充質干細胞裂解液對食管癌EC9706細胞中uPA、MMP-2的影響.pdf

1、背景：食管癌是消化道常見的惡性腫瘤，發(fā)病率高，占世界惡性腫瘤中第八位，在中國居第四位。盡管人們對其進行了長期的研究，包括手術切除、化學治療及放射治療等一系列的治療方案，但其5年生存率仍僅為15％。導致食管癌術后死亡率高的原因很多，術后轉移是重要的原因之一。
　　尿激酶型纖溶酶原激活物（urokinase plasminogen activator，uPA）能激活纖溶酶及其他多種蛋白溶解酶。它們在腫瘤的侵襲及轉移過程中也具有促進作用

2、，因為可以降解阻礙細胞轉移的天然屏障細胞外基質(extracellular matrix，ECM)等，給腫瘤細胞清除了轉移過程中的阻力?；|金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）具有降解ECM，破壞基膜（basement membranae，BM）完整性的酶系統(tǒng)，在腫瘤細胞侵襲轉移中起著非常關鍵的作用。實驗已經(jīng)證實，人臍帶間充質干細胞（humanumbilical cord mesenchymal s

3、tem cells，hUCMSCs）裂解液對食管癌細胞EC9706的增殖和遷移均有抑制作用。
　　目的：本實驗重點是探索hUCMSCs裂解液對食管癌EC9706細胞中uPA、MMP-2的表達的影響。為進一步研究抑制作用機理奠定理論基礎。為臨床應用干細胞抑制食管癌腫瘤轉移的治療方法提供理論依據(jù)。
　　方法：1.培養(yǎng)食管癌EC9706細胞;2.采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)hUCMSCs，待細胞傳至第3代后流式細胞儀檢測細胞表型;3.收集

4、hUCMSCs，用反復凍融法制備hUCMSCs裂解液;4.各個組擁有相同數(shù)量的食管癌EC9706細胞，向每組加入不同數(shù)量的hUCMSCs裂解液，然后培養(yǎng)60h。使用Western-blot法檢測食管癌EC9706細胞中uPA、MMP-2的表達變化。
　　結果食管癌細胞EC9706在倒置顯微鏡下觀察其呈多邊形，形態(tài)多樣，細胞核質比較大，細胞核形態(tài)不規(guī)則，細胞群體排列不規(guī)則。
　　hUCMSCs組織塊培養(yǎng)法原代培養(yǎng)7-12d后，

5、顯微鏡下可見梭形或多角形成纖維細胞。隨后可以發(fā)現(xiàn)hUCMSCs呈成纖維狀，漩渦狀排列。流式細胞儀分析第3代hUCMSCs可檢測到實驗組各組細胞CD90、CD166等MSCs標志物高表達，不表達造血細胞表面特異性標志CD34、CD45。
　　當用hUCMSCs裂解液處理過食管癌EC9706細胞后，uPA在對照組中的表達為0.28075±0.00233，在1/2倍組中的表達為0.28790±0.00176，在1倍組中的表達為0.137

6、82±0.00542，在2倍組中的表達為0.12465±0.01277。MMP-2在對照組中的表達為0.27051±0.01956，在1/2倍組中的表達為0.26698±0.00231，在1倍組中的表達為0.13017±0.01529，在2倍組中的表達為0.11755±0.00982。當加入hUCMSCs數(shù)小于食管癌細胞數(shù)的裂解液時uPA、MMP-2的表達變化不明顯（P＞0.05），當加入hUCMSCs數(shù)大于或等于食管癌細胞數(shù)的裂解液時