雙糖鏈蛋白聚糖Biglycan在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、研究目的:
　　 子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道三大惡性腫瘤之一,近年來(lái)發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。和其它惡性腫瘤一樣,子宮內(nèi)膜癌也是由于多種因子的調(diào)控紊亂,使細(xì)胞增殖和死亡過(guò)程失衡,引起細(xì)胞異常增殖和持續(xù)分裂,最終導(dǎo)致癌變。雙糖鏈蛋白聚糖(Biglycan,簡(jiǎn)稱BGN)是富含亮氨酸的蛋白聚糖家族(SLRPs)的成員,是細(xì)胞外基質(zhì)的組成部分。Biglycan是基因擴(kuò)增的產(chǎn)物,廣泛分布在發(fā)育的軟骨、骨、纖維組織和牙周組織中。最近研究表明,Bigly

2、can在骨肉瘤、結(jié)腸癌等腫瘤中表達(dá)增強(qiáng),提示其和腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。但在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)情況國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道,因此,本課題旨在轉(zhuǎn)錄和蛋白水平研究子宮內(nèi)膜癌組織和細(xì)胞中Biglycan的表達(dá)情況,為探討其在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　 研究方法:
　　 采用免疫組化染色方法,檢測(cè)10例正常、10例非典型增生和53例子宮內(nèi)膜癌組織中的Biglycan蛋白表達(dá),分析其與臨床病理指標(biāo)和預(yù)后的關(guān)系。收集200

3、2至2007年山東大學(xué)齊魯醫(yī)院病理科53例子宮內(nèi)膜癌手術(shù)切除標(biāo)本蠟塊,平均年齡53歲,均有完整的臨床及病理資料,術(shù)前均未接受化療和放療,其中子宮內(nèi)膜腺癌41例,腺鱗癌4例,漿液性乳頭狀癌4例,透明細(xì)胞癌3例,鱗癌1例。按照FIGO2000分期標(biāo)準(zhǔn),Ⅰ期30例,Ⅱ期7例,Ⅲ期15例,Ⅳ期1例;組織學(xué)分級(jí):高分化15例,中分化21例,低分化17例。另選10例正常10例非典型增生子宮內(nèi)膜組織作對(duì)照。
　　 采用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反

4、應(yīng)(Real-time RT-qPCR)檢測(cè)3例不典型增生性子宮內(nèi)膜和12例子宮內(nèi)膜癌新鮮組織中Biglycan轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)。手術(shù)室內(nèi)取患者手術(shù)切除的新鮮癌灶標(biāo)本和距癌灶邊緣至少5cm以外的子宮內(nèi)膜癌組織,取得標(biāo)本后立即放入液氮中速凍并隨后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存,準(zhǔn)備做逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)。
　　 采用蛋白免疫印記(Western Blot)檢測(cè)5株子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中Biglycan的表達(dá)情況。其中ECC-1為高分化細(xì)胞株,HEC-

5、1A和RL95-2為中分化細(xì)胞株,KLE和AN3CA為低分化細(xì)胞株。并用肝癌細(xì)胞株HepG2作為陽(yáng)性對(duì)照。
　　 研究結(jié)果:
　　 (1)Biglycan在正常內(nèi)膜、非典型增生子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)Biglycan蛋白陽(yáng)性染色表現(xiàn)為細(xì)胞漿呈棕褐色。Biglycan在正常子宮內(nèi)膜中表達(dá)均陰性;在非典型增生子宮內(nèi)膜組織中表達(dá)陰性或弱陽(yáng)性;在子宮內(nèi)膜癌癌細(xì)胞中的表達(dá)評(píng)分為1.09±0.86,在癌性間質(zhì)中的表達(dá)評(píng)分為1.3

6、2±0.86,無(wú)顯著差異(P＞0.05),但兩者具有顯著相關(guān)性(r=343,P=0.012)。
　　 (2)子宮內(nèi)膜癌中Biglycan表達(dá)與不同臨床指標(biāo)間的關(guān)系
　　 Biglycan蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率與子宮內(nèi)膜癌的組織類型和FIGO分期均無(wú)關(guān)(P＞0.05)。在組織學(xué)分級(jí)中,Biglycan在癌細(xì)胞中的表達(dá)無(wú)顯著差異(P＞0.05);但低分化組的Biglycan在癌性間質(zhì)細(xì)胞中的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于高、中分化組,差異有

7、顯著性(P＜0.05)。
　　 (3)Biglycan的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系
　　 統(tǒng)計(jì)53例子宮內(nèi)膜癌患者的隨訪資料,以1.8分作為癌性間質(zhì)表達(dá)的陽(yáng)性界定,在生存曲線中,Biglycan癌性間質(zhì)表達(dá)陽(yáng)性的患者比表達(dá)陰性的患者生存時(shí)間短,預(yù)后差,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (4)Real-time PCR結(jié)果顯示子宮內(nèi)膜癌中Biglycan mRNA的表達(dá)顯著高于不典型增生性子宮內(nèi)膜,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

8、(P＜0.05)。
　　 (5)Western Blot結(jié)果顯示Biglycan在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株ECC-1、KLE中高表達(dá),在AN3CA、HEC-1A細(xì)胞中低表達(dá),為下一步基因轉(zhuǎn)染做準(zhǔn)備。
　　 研究結(jié)論:
　　 (1)Biglycan可能在子宮內(nèi)膜癌中作為癌基因發(fā)揮作用,其可能通過(guò)作用于癌性間質(zhì)在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。
　　 (2)Biglycan在癌性間質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)與組織分化程度和患者