氨溴索對白假絲酵母菌生物膜干預作用的研究.pdf

1、第一部分 四氮鹽(XTT)減低法定量分析氨溴索對白假絲酵母菌生物膜形成過程的干預作用
　　目的：用四氮鹽（XTT）減低法定量分析氨溴索對體外白假絲酵母菌(Candidaalbicans,C.albicans)生物膜(biofilm,BF)形成過程的抑制作用。
　　方法：用微孔板法建立體外不同時間段的白假絲酵母菌ATCC10231BF模型；采用甲基四氮鹽（theabatedtetrazoliumsalt,XTT）減低法定量評價

2、氨溴索對不同時間段的白假絲酵母菌BF的抑制作用；銀染后，倒置顯微鏡下觀察該藥對白假絲酵母菌成熟BF的形態(tài)學影響。
　　結果：在96孔微量細胞培養(yǎng)板上成功建立白假絲酵母菌90min、24h、48hBF模型。0（空白對照組）、0.25mg/ml、1.5mg/ml的氨溴索干預90min的白假絲酵母菌BF，作用8h后，XTT減低法測OD450的值分別為2.18±0.10、1.91±0.14、0.59±0.11；相同濃度的氨溴索干預24h的

3、BF后，OD450的值分別為3.16±0.15、2.83±0.11、1.08±0.15；相同濃度的氨溴索干預48h的BF后，OD450的值分別為3.23±0.10、2.92±0.11、1.21±0.12；相同時間段的BF，組間比較有顯著性差異（P＜0.05）。利用銀染法可觀察到氨溴索干預白假絲酵母菌成熟BF后，呈密集針織樣網(wǎng)狀結構的BF其結構變得疏松，部分網(wǎng)狀結構斷裂，且1.5mg/ml的氨溴索較0.25mg/ml的氨溴索干預效果更明顯

4、。
　　結論：氨溴索對體外不同時間段的白假絲酵母菌BF均有抑制作用，且在一定藥物濃度范圍內(nèi)隨著該藥藥物濃度的增加，對BF的抑制作用顯著增強。銀染法可以定性觀察氨溴索對白假絲酵母菌成熟BF的影響。
　　第二部分 氨溴索對白假絲酵母菌生物膜形成過程的影響及結構定量化分析
　　目的：利用激光共聚焦顯微鏡（ConfocalLaserScanningMicroscopy，CLSM）觀察氨溴索對白假絲酵母菌ATCC10231菌株B

5、F形成過程的影響，并用圖像結構分析軟件（ImageStructureAnalyzer,ISA）對BF結構參數(shù)進行定量分析。采用ImageProPlus6.0分析軟件分析氨溴索對BF內(nèi)白假絲酵母菌死亡率的影響。
　　方法：置片法培養(yǎng)90min、24h和48h的白假絲酵母菌ATCC10231菌株BF模型，分別將其分為3組，為空白對照組、氨溴索0.25mg/ml組、氨溴索1.5mg/ml組，藥物作用8小時。在空白對照組中，用FITC-C

6、onA染色后在熒光顯微鏡下觀察BF的動態(tài)形成過程。通過熒光探針SYTO9/PI標記，利用CLSM動態(tài)觀察氨溴索干預后，對BF形成過程的影響，并應用ISA軟件對BF結構參數(shù)進行定量分析。采用ImageProPlus6.0軟件分析氨溴索干預后，BF內(nèi)白假絲酵母菌的死亡率。
　　結果：在空白對照組，運用熒光顯微鏡可觀察到生長在玻片上呈綠色點片狀的BF，隨著培養(yǎng)時間的延長綠色熒光增多增強，逐漸形成針織網(wǎng)狀結構。ISA軟件定量分析顯示：在空

7、白對照組中，隨著培養(yǎng)時間的延長，BF逐漸變厚，平均擴散距離（AverageDiffusionDistance,ADD）和結構熵（TextualEntropy,TE）呈增加的趨勢，區(qū)域孔率（ArealPorosity,AP）呈下降趨勢。分別用0.25mg/ml和1.5mg/ml氨溴索干預90minBF、24hBF和48hBF，作用8h后與空白對照組相比，BF厚度、ADD和TE均減少（P＜0.05），AP增加（P＜0.05）。IPP軟件分析

8、顯示：分別用0.25mg/ml和1.5mg/ml氨溴索干預90minBF、24hBF和48hBF，作用8h后與空白對照組相比，BF內(nèi)白假絲酵母菌死亡率增加（P＜0.05）；高濃度組（1.5mg/ml）與低濃度組（0.25mg/ml）相比，高濃度組BF內(nèi)白假絲酵母菌死亡率增加更明顯（P＜0.05）。
　　結論：ISA軟件可以對氨溴索對白假絲酵母菌ATCC10231菌株BF的形成過程進行定量分析。氨溴索干預各個時間段白色念株菌BF后，