熱帶假絲酵母菌對氟康唑耐藥機制的研究.pdf

1、背景:近年來,隨著癌癥、艾滋病、糖尿病、器官移植等患者的增多,抗腫瘤藥物、免疫抑制劑、糖皮質激素、廣譜抗生素、醫(yī)源侵入性操作的廣泛使用,真菌感染尤其是深部真菌感染的發(fā)生率日益提升,而假絲酵母菌是最常見的深部感染真菌。盡管白假絲酵母菌依然是感染最多的假絲酵母菌,但在某些地區(qū)熱帶假絲酵母菌已成為僅次于白假絲酵母菌的第二位假絲酵母菌。由于臨床上三唑類藥物氟康唑的廣泛使用,熱帶假絲酵母菌對氟康唑的耐藥率呈上升趨勢,影響了臨床上對熱帶假絲酵母菌感

2、染的療效。
　　目前證實真菌對氟康唑耐藥有關的機制主要包括氟康唑靶酶羊毛甾醇14α-DM的表達增加和結構變異,以及外排蛋白在轉錄水平上的表達量增加。目前熱帶假絲酵母菌對氟康唑耐藥機制的研究較少。本課題對安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院2010-2012年收集的熱帶假絲酵母菌對氟康唑的耐藥機制進行研究。
　　目的:了解分離的熱帶假絲酵母菌的臨床分布,耐藥性及其對氟康唑的耐藥機制。
　　方法:(1)使用法國CHRO Magar念珠

3、菌顯色培養(yǎng)基和ATB ID32C鑒定板鑒定2010-2012年從安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院分離的假絲酵母菌,運用ATB Fungus3藥敏板條檢測熱帶假絲酵母菌對氟康唑,伊曲康唑,伏立康唑,5-氟胞嘧啶,兩性霉素B的敏感性,使用Whonet5.6軟件分析熱帶假絲酵母菌的臨床分布特征和對5種抗真菌藥物的耐藥性。
　　(2)收集所有對氟康唑耐藥的熱帶假絲酵母菌,共8株,再從敏感的熱帶假絲酵母菌中隨機抽取17株,共計25株。 PCR擴增它

4、們的靶酶基因ERG11并測序分析,運用實時熒光定量PCR技術檢測耐藥菌株與敏感菌株靶酶基因ERG11和外排基因CDR1、MDR1的相對表達水平。
　　結果:(1)熱帶假絲酵母菌共分離出187株,占假絲酵母菌的9.35％,排名第三位,熱帶假絲酵母菌分布最多的科室是重癥監(jiān)護科(占27.22%),標本來源最多的是痰液(占57.75%),感染熱帶假絲酵母菌的患者最多是61歲及其以上的老年人(占62.03%),187株熱帶假絲酵母菌共有8株

5、對氟康唑耐藥,且其均對伊曲康唑和伏立康唑耐藥,耐藥率為4.28%,2010-2012年間熱帶假絲酵母菌對氟康唑的耐藥率分別是2.33%,3.77%和8.33%。
　　(2)靶酶基因ERG11通過測序并通過BLAST比對后顯示敏感株未出現(xiàn)氨基酸突變位點,而耐藥株出現(xiàn)3個氨基酸突變位點(Y132F,S154F,K143Q);熒光定量PCR檢測結果顯示靶酶基因ERG11和外排基因MDR1在耐藥菌株和敏感菌株之間的高表達率有顯著差異(P<

6、0.05),而外排基因CDR1在這兩者之間無顯著差異(P>0.05)。
　　結論:(1)熱帶假絲酵母菌的臨床分布特征:所在科室多為重癥監(jiān)護科,標本來源多為痰液,患者年齡分布多為61歲及以上的老年人。
　　(2)熱帶假絲酵母菌對氟康唑的耐藥率逐漸升高,氟康唑,伊曲康唑和伏立康唑在熱帶假絲酵母菌中存在交叉耐藥現(xiàn)象。
　　(3)熱帶假絲酵母菌ERG11的氨基酸突變位點Y132F,S154F參與其對氟康唑的耐藥機制,K143Q