戊二醛-辛醇、環(huán)氧化合物及染料介導(dǎo)光氧化處理的牛頸靜脈的毒理學(xué)評(píng)價(jià).pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體內(nèi)微核、染色體畸變實(shí)驗(yàn)與體外鼠傷寒沙門(mén)氏菌回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)(AMES實(shí)驗(yàn))評(píng)價(jià)戊二醛／辛醇、環(huán)氧化合物、染料介導(dǎo)光氧化處理的牛頸靜脈對(duì)機(jī)體的遺傳毒性作用；通過(guò)熱原實(shí)驗(yàn)與全身毒性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)以上三種方法處理的牛頸靜脈對(duì)機(jī)體的一般毒性作用。 方法：將戊二醛／辛醇、環(huán)氧化合物、染料介導(dǎo)光氧化處理的牛頸靜脈按照標(biāo)準(zhǔn)制作浸提液。 一．遺傳毒性實(shí)驗(yàn)：(1)．微核實(shí)驗(yàn)：將三種浸提液及陰性、陽(yáng)性對(duì)照物注入小鼠腹腔。每隔24小時(shí)

2、重復(fù)注射一次，共4次。末次注射后24小時(shí)取股骨骨髓細(xì)胞制作涂片，Giemsa染色，光鏡下計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，觀察含有微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)，以微核率表示。用SPSSl2.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行X<'2>檢驗(yàn)分析。(2)．染色體畸變實(shí)驗(yàn)：供試液注射與微核實(shí)驗(yàn)相同。第4次注射后20小時(shí)腹腔注射秋水仙素，4小時(shí)后取股骨骨髓經(jīng)低滲、固定處理，細(xì)胞懸液制作涂片，Giemsa染色。光鏡下觀察100個(gè)分散良好的中期分裂相細(xì)胞，記錄染色體結(jié)構(gòu)異常和數(shù)

3、目異常的細(xì)胞，計(jì)算其畸變細(xì)胞率。統(tǒng)計(jì)方法同前。(3).AMES實(shí)驗(yàn)：在頂層培養(yǎng)基中依次加入測(cè)試菌株新鮮增菌液，混勻后分別加入浸提液、生理鹽水或陽(yáng)性對(duì)照物，加與不加S-9活化系統(tǒng)各半，傾倒在底層培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)48小時(shí)。計(jì)數(shù)每皿上長(zhǎng)出回變菌落數(shù)。 二．全身毒性實(shí)驗(yàn)：(1)．熱原實(shí)驗(yàn)：新西蘭大白兔測(cè)其平均正常體溫后，耳緣靜脈注入浸提液，每隔1小時(shí)測(cè)量其體溫1次，共6次，取該兔體溫的最大升高溫度(℃)，并計(jì)算3只家兔最大體溫升高總

4、和。(2)．全身毒性實(shí)驗(yàn)：(a)．急性毒性實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)小鼠由尾靜脈注入供試液，觀察注射后4，24，48和72h的毒性反應(yīng)程度分級(jí)；(b)．亞急性毒性實(shí)驗(yàn)：注射方法同急性毒性實(shí)驗(yàn)，隔日重復(fù)注射一次，第28日取血作血常規(guī)及生化檢查，用SPSS12.0軟件包對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行X<'2>檢驗(yàn)分析；(c)．慢性毒性實(shí)驗(yàn)：注射方法同急性毒性實(shí)驗(yàn)，第60日取血作血常規(guī)及生化檢查，統(tǒng)計(jì)方法同前。 結(jié)果：一．遺傳毒性實(shí)驗(yàn)：(1)．微核實(shí)驗(yàn)：陰性對(duì)照組雄

5、性、雌性小鼠的股骨骨髓細(xì)胞微核率分別為1‰與1.2‰，辛醇組為2.2‰與1‰，PC組為1．2.‰與1.8‰，光氧化組為1.8‰與1.6‰，各組之間x<'2>檢驗(yàn)分析無(wú)顯著差異性(p>0.05)；試驗(yàn)組微核率與陽(yáng)性對(duì)照環(huán)磷酰胺組(分別為29‰和37.6‰)有顯著差異性(p<0.05)；(2)．染色體畸變實(shí)驗(yàn)：陰性對(duì)照組雄性、雌性小鼠的股骨骨髓細(xì)胞染色體畸變率分別為1％與1.6％，辛醇組為1.8％與1.6％，PC組為2.0％與1.8％經(jīng)，光

6、氧化組為2.2％與1.8％，各組之間x<'2>檢驗(yàn)分析無(wú)顯著差異性(p>O.05)；試驗(yàn)組微核率與陽(yáng)性對(duì)照環(huán)磷酰胺組(分別為20.6％和25.2％)有顯著差異性(p<0.05)；(3)．AMES實(shí)驗(yàn)：陽(yáng)性對(duì)照組的菌落數(shù)超過(guò)陰性對(duì)照組菌落數(shù)的2倍，而各實(shí)驗(yàn)組的菌落數(shù)均未超過(guò)陰性對(duì)照組菌落數(shù)的2倍，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性。 二．全身毒性實(shí)驗(yàn)：(1)．熱原實(shí)驗(yàn)：各實(shí)驗(yàn)組體溫升高均在0.6℃以下，上升體溫總和在1.4℃以下；(2)．全身毒性實(shí)驗(yàn)

7、：急性毒性實(shí)驗(yàn)毒性反應(yīng)程度均為正常，小鼠體重?zé)o明顯下降，均無(wú)中毒反應(yīng)和死亡；亞急性毒性試驗(yàn)及慢性毒性實(shí)驗(yàn)各實(shí)驗(yàn)組血常規(guī)及生化指標(biāo)與陰性對(duì)照組經(jīng)x<'2>檢驗(yàn)分析，P>0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：l辛醇、環(huán)氧化合物、光氧化處理的牛頸靜脈無(wú)明顯致染色體損傷作用； 2辛醇、環(huán)氧化合物、光氧化處理的牛頸靜脈無(wú)明顯致基因突變作用； 3辛醇、環(huán)氧化合物、光氧化處理的牛頸靜脈對(duì)被植入體無(wú)明顯毒性作用； 4辛醇、環(huán)氧化