去細(xì)胞結(jié)合染料介導(dǎo)的光氧化技術(shù)處理同種異體小靜脈的性能研究.pdf

1、目的:對兔頸靜脈采用不同的去細(xì)胞及光氧化處理方案,探討較理想的同種異體小靜脈去細(xì)胞光氧化處理方法,了解此種方法制備的可行性。建立異體兔頸動脈置換模型,對去細(xì)胞結(jié)合光氧化交聯(lián)處理的兔頸靜脈進(jìn)行體內(nèi)研究,評價其作為冠狀動脈旁路搭橋術(shù)中異體血管來源的可行性。
　　方法:將130根新鮮兔頸靜依據(jù)不同去細(xì)胞處理方案分為去細(xì)胞組(Ⅱ-ⅩⅢ組)和新鮮血管對照組(Ⅰ組)。通過HE染色評價細(xì)胞成分去除程度,探討較理想的去細(xì)胞方案。取較理想的去細(xì)胞方

2、案行進(jìn)一步光氧化,將40根新鮮兔頸靜脈分為新鮮血管組(F0組),去細(xì)胞光氧化1小時組(DP1h組),去細(xì)胞結(jié)合光氧化2小時組(DP2h組)及去細(xì)胞結(jié)合光氧化3小時組(DP3h組)共4組(n=10)。通過Masson染色、熱皺縮溫度、抗張強(qiáng)度、含水量測定,探討較理想的光氧化處理方案。比較去細(xì)胞光氧化處理的兔頸靜脈與深低溫-玻璃化及戊二醛處理的兔頸靜脈的在體性能。采用清潔級純種兔50只,隨機(jī)分為去細(xì)胞光氧化處理組(DP組),深低溫-玻璃化法

3、保存組(CP組),戊二醛保存組(GA組)以及假手術(shù)組(F組)共4組(n=15)。建立異體兔頸動脈置換模型(n=50),以普通飼料外加華法林抗凝飼養(yǎng)觀察。在術(shù)后2周、4周、8周通過頸動脈彩超檢查評價各組血管的通暢情況及血流動力學(xué)情況。每次屠宰移植血管已閉塞的實驗動物,8周時統(tǒng)一處死所有實驗動物。通過形態(tài)學(xué)觀察、HE染色、免疫組織化學(xué)方法評價各組血管在體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)中的生物穩(wěn)定性及內(nèi)膜增生情況;通過掃描電鏡比較各組血管的內(nèi)皮化程度,評價血管重

4、塑情況。
　　結(jié)果:去細(xì)胞靜脈HE染色顯示:經(jīng)0.5％曲那通X—100 6h+0.025%胰蛋白酶/0.02%EDTA 10min+20u/mlDNase-I及0.2mg/ml RNase-A 6h處理的兔頸靜脈與新鮮血管最為相似;Masson染色顯示去細(xì)胞后血管膠原結(jié)構(gòu)稀疏,組織松散,光氧化后組織結(jié)構(gòu)變得緊湊(以光氧化處理2小時組最明顯);機(jī)械性能逐漸恢復(fù),光氧處理化2小時與新鮮血管最為相似(P＞0.05)。異體兔頸動脈置換術(shù)后

5、各組血管均無瘤樣擴(kuò)張,術(shù)后8周移植靜脈累計通暢率:F組100%,GA組0%,DP組86.7%,CP組28.6%。HE染色、掃描電鏡檢測顯示:GA組未見內(nèi)皮細(xì)胞再生,膠原變性,大量炎性細(xì)胞浸潤;CP組團(tuán)塊狀內(nèi)皮細(xì)胞逐漸長入,散在分布,炎性細(xì)胞浸潤;DP組管道內(nèi)壁內(nèi)皮細(xì)胞覆蓋較好,內(nèi)皮化程度較高,有新生血管形成,膠原結(jié)構(gòu)保持完好;Ⅷ因子染色顯示GA組未見內(nèi)皮細(xì)胞生長;CP組少量散在內(nèi)皮細(xì)胞分布,細(xì)胞排列紊亂;DP組內(nèi)皮覆蓋廣泛,細(xì)胞生長良好

6、。PCNA染色顯示DP組陽性細(xì)胞表達(dá)率明顯低于CP組(P＜0.05),CP組明顯低于GA組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.采用多步驟去垢劑-酶消化法(0.5%曲那通X-1006h,0.025%胰蛋白酶/0.02%EDTA 10min和20u/mlDNase-I及0.2mg/mlRNase-A 6h)去細(xì)胞結(jié)合光氧化處理2小時是處理同種異體小靜脈較理想的方案。2.去細(xì)胞結(jié)合染料介導(dǎo)的光氧化反應(yīng)處理的兔頸靜脈行兔頸動脈置換,血流動力