CT聯(lián)合ESA鼻內免疫小鼠誘導的抗弓形蟲感染保護性免疫應答.pdf

1、目的：觀察霍亂毒素(cholera toxin，CT)聯(lián)合弓形蟲排泄-分泌抗原(excreted-secretedantigens，ESA)滴鼻免疫小鼠的黏膜佐劑的適宜劑量以及鼻內免疫小鼠誘導的黏膜及系統(tǒng)免疫應答，確定其抗弓形蟲感染的作用。為弓形蟲黏膜疫苗研制提供實驗基礎。
　　 方法：分三部分：第一部分觀察不同劑量CT聯(lián)合ESA滴鼻免疫小鼠的黏膜佐劑效應。5～6周齡BALB/c小鼠60只隨機分為5組，每組12只，分別以0、0.

2、5、1.0、1.5或2.0μgCT聯(lián)合ESA20μg滴鼻免疫小鼠，間隔2周免疫2次。末次免疫后30 d，觀察小鼠的健康狀況、存活率。眼靜脈叢采血后頸椎脫臼處死全部小鼠，分離脾、Peyer's patch(PP)、腸系膜淋巴結(MLN)計數淋巴細胞。用ELISA法檢測血清IgG和糞便sIgA水平。第二部分：觀察CT聯(lián)合ESA鼻內免疫小鼠誘導黏膜免疫及系統(tǒng)免疫應答的效果。5～6周齡BALB/c小鼠48只隨機分為3組，每組16只。分別用PBS

3、20μl、ESA20μg或CT1.0μg+ESA20μg/只滴鼻免疫小鼠2次，間隔2周。末次免疫后14d，頸椎脫臼處死小鼠，ELISA測定糞便和鼻咽沖洗液sIgA抗體水平；計數PP、腸上皮淋巴細胞(IEL)、鼻相關淋巴組織(NALT)、鼻通道(NC)淋巴細胞數，免疫細胞化學法檢測CD4+、CD8+T細胞亞群水平。第三部分：觀察CT聯(lián)合ESA鼻內免疫小鼠誘導的抗弓形蟲感染作用。6周齡BALB/c小鼠60只，隨機分為3組，每組20只。分別用

4、PBS20μl、ESA20μg或CT1.0μg+ESA20μg/只滴鼻免疫2次，間隔2周。末次免疫后14 d，用4×104個弓形蟲速殖子/只灌胃攻擊所有小鼠，觀察小鼠健康及死亡情況。速殖子攻擊后30 d，全部小鼠被摘眼球采血后處死，ELISA法檢測血清IgG和糞便sIgA，計數肝、腦組織內弓形蟲速殖子，分離并計數PP和脾淋巴細胞數。
　　 結果：CT聯(lián)合ESA鼻內免疫小鼠誘導了MLN、PP和脾淋巴細胞高水平免疫應答，并均呈現(xiàn)一定

5、的劑量效應，顯著高于無佐劑組(P＜0.05)，但較高劑量組(1.0μg、1.5μg和2.0μg)之間無顯著差異(P＞0.05)。1.0μgCT聯(lián)合ESA鼻內免疫小鼠既誘導了較高的黏膜和系統(tǒng)免疫應答，又對小鼠的健康沒有不良影響，為適宜劑量。CT佐劑聯(lián)合ESA滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效誘導GALT和NALT黏膜部位免疫應答。CT佐劑組小鼠鼻咽沖洗液和糞便sIgA水平均顯著高于ESA組和PBS組(P＜0.01)，CT佐劑組糞便sIgA水平

6、也顯著高于ESA組(P＜0.01)。CT佐劑組和ESA組小鼠GALT部位的PP淋巴細胞增生顯著(P＜0.01)，主要以CD4+T細胞為主；而IEL以CD8+T細胞增生為主(P＜0.01)，CD4+/CD8+比值降低(P＜0.05)。CT佐劑組NALT內淋巴細胞明顯增生(P＜0.01)，其中CD4+、CD8+T細胞均有增生(P＜0.01)，CD4+/CD8+比值降低(P＜0.05)。CT佐劑組NC中淋巴細胞數明顯升高(P＜0.01)，以C

7、D4+T細胞為主(P＜0.01)。CT作為佐劑聯(lián)合ESA滴鼻免疫小鼠誘導的免疫應答可有效抵抗弓形蟲速殖子攻擊。CT作為佐劑聯(lián)合ESA滴鼻免疫小鼠的健康狀況明顯好于PBS組和ESA組，存活率(95％)也顯著高于PBS組(55％)。與PBS組相比，CT+ESA組肝和腦組織內速殖子數分別減少了80.19％(P＜0.001)和78.24％(P＜0.005)。
　　 結論：CT具有顯著的佐劑效應，CT作為佐劑聯(lián)合ESA滴鼻免疫小鼠可誘導黏