腫瘤相關(guān)抗原OVA66的連續(xù)性B細(xì)胞表位定位.pdf

1、OVA66是本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用重組cDNA表達(dá)文庫血清學(xué)分析（SEREX）技術(shù)篩選人卵巢癌cDNA文庫得到的一種新的腫瘤相關(guān)抗原。前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明OVA66在正常組織中主要表達(dá)于睪丸，而在大部分腫瘤組織中（胃癌、肝癌、卵巢癌等）高表達(dá)，呈CT抗原的表達(dá)特點(diǎn)，且OVA66的高表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，有利于腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。OVA66是一個(gè)廣泛的具有免疫原性的腫瘤相關(guān)抗原，不僅能誘導(dǎo)特異性T細(xì)胞克隆的產(chǎn)生，還能激發(fā)人體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答，提示

2、其在臨床腫瘤診斷和治療方面具有良好的前景。本文對腫瘤相關(guān)抗原OVA66的連續(xù)性B細(xì)胞表位定位進(jìn)行了研究。主要內(nèi)容包括兩個(gè)方面： ㈠OVA66及其三個(gè)片段融合蛋白的表達(dá)純化及抗原表位初步定位原核表達(dá)并純化pET28b-OVA66融合蛋白，同時(shí)將OVA66基因分成三個(gè)片段，構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a-OVA66片段1、pET28a-OVA66片段2和pET28a-OVA66 片段3 并分別原核表達(dá)，純化得pET28a-OVA66 三個(gè)

3、片段融合蛋白。收集癌癥患者和正常人血清，建立ELISA法，結(jié)合Westernblot結(jié)果，獲得17例OVA66抗體陽性的癌癥患者血清，Western blot發(fā)現(xiàn)其中一例患者血清所針對的抗原表位位于OVA66片段3，而本實(shí)驗(yàn)室自制的兩株小鼠抗OVA66單克隆抗體5F4和4G9則分別作用于片段1和片段2。 ㈡OVA66蛋白連續(xù)性B細(xì)胞抗原表位的預(yù)測及篩選應(yīng)用生物信息學(xué)方法，綜合單參數(shù)（親水性、可及性、柔韌性、極性）預(yù)測、二級結(jié)構(gòu)預(yù)

4、測、BcePred 及EpiShotTM軟件的預(yù)測結(jié)果，提示OVA66的連續(xù)性B細(xì)胞表位可能位于392-411，270-289，519-538，461-480，10-29，43-55，212-227，284-301和487-501氨基酸殘基的區(qū)域內(nèi)，合成這些候選表位肽段并應(yīng)用EILSA 法，分別以小鼠抗OVA66單抗及多抗、兔抗OVA66多抗及17例OVA66抗體陽性的癌癥患者血清作為一抗篩選肽段，以大于空白孔OD值2 倍作為陽性，發(fā)現(xiàn)

5、小鼠多抗作用于肽段P2（OVA66片段2內(nèi)）和P5（OVA66片段1內(nèi)），兔多抗作用于肽段P8（OVA66片段2內(nèi)），而1例癌癥患者作用于肽段P9（OVA66片段3內(nèi)）。 本研究成功構(gòu)建了重組載體pET28a-OVA66片段1、pET28a-OVA66片段2和pET28a-OVA66片段3，表達(dá)并純化了OVA66及其三個(gè)片段融合蛋白。獲得了2條（P2、P5）小鼠抗OVA66多抗針對的表位肽段，1條（P8）兔多抗針對的表位肽段及1