探討腫瘤相關抗原OVA66的致瘤機制.pdf

1、OVA66 是本實驗室運用重組cDNA 表達文庫血清學分析技術(SEREX)從卵巢癌文庫中篩選得到一個新的候選腫瘤相關基因，但是對于該分子在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，目前的研究結果還是空白。本實驗室前期研究表明，OVA66 基因高表達可促進腫瘤細胞的增殖，有利于細胞的侵襲和轉移。阻斷OVA66 基因的表達后，腫瘤細胞生長增殖降低，血管生成明顯減弱，并發(fā)現(xiàn)明顯的凋亡現(xiàn)象，提示OVA66 基因在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉歸過程中可能具有重要的生物學功

2、能。為進一步探討OVA66 在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉歸過程中的作用機制，本研究主要從以下兩個方面展開： 一、腫瘤相關基因OVA66 的組織、細胞表達譜的分析及其相關作用基因 應用RT-PCR 和免疫組化技術進一步明確OVA66 基因在組織和細胞株中的表達格局。結果表明，OVA66 基因除了在睪丸中表達較高外，在其他正常組織中均低表達（如心臟，肝，肺，腎，子宮內膜，骨骼肌，卵巢和外周血）或不表達（正常胃組織和部分卵巢組織）。在

3、大部分腫瘤組II織中OVA66 基因表達相對于正常組織則明顯升高；在大部分腫瘤細胞株（如SGC-7901，BGC823，MKN28，AGS，NCI-N87 等）和正常組織來源的細胞株（如WISH，張氏肝細胞及HL-7702）則呈現(xiàn)高表達；OVA66 蛋白在胃、結腸及卵巢的惡性腫瘤組織中的表達明顯高于良性腫瘤組織。提示OVA66 基因在具有較強代謝和生長能力的組織和細胞中的表達較高。 通過比較分析OVA66 低表達和高表達的卵巢癌

4、腫瘤組織標本基因芯片結果發(fā)現(xiàn)，OVA66 基因高表達的卵巢癌組織中CCNE1,FOSL2 等基因表達上調，TP53,NME1 等基因表達則下調。 二、應用基因芯片和蛋白質組學技術篩選與OVA66 相互作用的基因和蛋白 在上述實驗基礎上，進一步以細胞株為研究對象，應用基因芯片篩選與OVA66 表達調控相關的基因，結果表明OVA66 基因高表達的細胞株中FOSL2,VEGF,FOS 等基因表達上調，Itgal，Myt1l 等

5、基因表達下調。 進一步驗證了OVA66 基因可能參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移。通過2-DE，發(fā)現(xiàn)轉染OVA66 基因腫瘤細胞與轉染空載體細胞相比有許多差異表達的蛋白。其中有參與糖酵解通路有關的多個蛋白（如丙酮酸激酶同工酶2、磷酸甘油酸激酶1、3-磷酸甘油醛脫氫酶等），提示OVA66 蛋白可能通過上調細胞的能量代謝途徑參與促進腫瘤的生長和增殖。熱休克蛋白家族成員HSC71 在高表達OVA66 的細胞中表達上調，提示OVA66 蛋白可