牛乳β-乳球蛋白構(gòu)象性表位定位及結(jié)構(gòu)特征研究.pdf

1、牛乳過(guò)敏是嚴(yán)重食物過(guò)敏之一,其中在1歲新生兒的發(fā)生率可以達(dá)到2.2％到2.8%。牛乳中含有20多種蛋白,其中β-乳球蛋白是牛乳中主要過(guò)敏原之一,約82%的牛乳過(guò)敏患者對(duì)β-乳球蛋白過(guò)敏。另外,過(guò)敏原表位包括線性和構(gòu)象性表位,它們是過(guò)敏反應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。相對(duì)于線性表位,人們對(duì)構(gòu)象性表位的認(rèn)知嚴(yán)重不足。毫無(wú)疑問(wèn),牛乳β-乳球蛋白構(gòu)象性表位的研究具有重要意義。
　　 本論文工作包括抗牛乳β-乳球蛋白特異性IgE的純化,噬菌體展示技術(shù)淘選

2、特異性模擬肽,生物信息學(xué)模擬構(gòu)象性表位、構(gòu)象性表位氨基酸的結(jié)構(gòu)特征。研究的主要方法結(jié)果及結(jié)論如下:
　　 1.以牛乳過(guò)敏患者的血清為樣品,通過(guò)Sepharose 4B親和柱和Protein G親和柱,逐步純化患者血清中特異性IgE抗體,建立了兩步法純化抗牛乳β-乳球蛋白特異性IgE的方法。選擇ELISA法檢測(cè)純化后IgE的純度,所得特異性抗體純度較高,而ELISA結(jié)果同時(shí)顯示IgE抗體經(jīng)純化后仍然保持了與牛乳β-乳球蛋白較高的結(jié)

3、合能力。
　　 2.采用親和淘選的方式,以純化的抗牛乳β-乳球蛋白特異性IgE為靶分子,經(jīng)過(guò)3輪淘選,隨機(jī)挑選32個(gè)克隆子,進(jìn)行測(cè)序鑒定,得到了三個(gè)模擬肽的核苷酸序列,推導(dǎo)的相應(yīng)氨基酸序列為DYSEHKE,TIPGQGP,NQKLSNL。
　　 3.將牛乳β-乳球蛋白的結(jié)構(gòu)和模擬肽序列輸入到網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器Pepitope中,通過(guò)比對(duì)模擬肽的參數(shù),成功地將模擬肽轉(zhuǎn)換成了牛乳β-乳球蛋白的3個(gè)構(gòu)象性表位,它們分別是A:Leu87

4、-Asn88-Asn90-Lys91-Glu108-Ser110,B:Ile2-The4-Pro113-Gin115-Pro144和C:Thr18-Tyr20-Glu44-Glu45-Lys47-Glu55-Glu157,其可信度依次為A＞B＞C。
　　 4.利用生物信息學(xué)軟件DNAStar以及SOPMA網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器,分析了3個(gè)牛乳β-乳球蛋白構(gòu)象性表位氨基酸結(jié)構(gòu)特征,它們主要是極性氨基酸。與預(yù)測(cè)的牛乳β-乳球蛋白的親水性、表面可