牛乳β-乳球蛋白構象性表位定位及結構特征研究.pdf

1、牛乳過敏是嚴重食物過敏之一,其中在1歲新生兒的發(fā)生率可以達到2.2％到2.8%。牛乳中含有20多種蛋白,其中β-乳球蛋白是牛乳中主要過敏原之一,約82%的牛乳過敏患者對β-乳球蛋白過敏。另外,過敏原表位包括線性和構象性表位,它們是過敏反應的物質基礎。相對于線性表位,人們對構象性表位的認知嚴重不足。毫無疑問,牛乳β-乳球蛋白構象性表位的研究具有重要意義。
　　 本論文工作包括抗牛乳β-乳球蛋白特異性IgE的純化,噬菌體展示技術淘選

2、特異性模擬肽,生物信息學模擬構象性表位、構象性表位氨基酸的結構特征。研究的主要方法結果及結論如下:
　　 1.以牛乳過敏患者的血清為樣品,通過Sepharose 4B親和柱和Protein G親和柱,逐步純化患者血清中特異性IgE抗體,建立了兩步法純化抗牛乳β-乳球蛋白特異性IgE的方法。選擇ELISA法檢測純化后IgE的純度,所得特異性抗體純度較高,而ELISA結果同時顯示IgE抗體經純化后仍然保持了與牛乳β-乳球蛋白較高的結

3、合能力。
　　 2.采用親和淘選的方式,以純化的抗牛乳β-乳球蛋白特異性IgE為靶分子,經過3輪淘選,隨機挑選32個克隆子,進行測序鑒定,得到了三個模擬肽的核苷酸序列,推導的相應氨基酸序列為DYSEHKE,TIPGQGP,NQKLSNL。
　　 3.將牛乳β-乳球蛋白的結構和模擬肽序列輸入到網絡服務器Pepitope中,通過比對模擬肽的參數(shù),成功地將模擬肽轉換成了牛乳β-乳球蛋白的3個構象性表位,它們分別是A:Leu87

4、-Asn88-Asn90-Lys91-Glu108-Ser110,B:Ile2-The4-Pro113-Gin115-Pro144和C:Thr18-Tyr20-Glu44-Glu45-Lys47-Glu55-Glu157,其可信度依次為A＞B＞C。
　　 4.利用生物信息學軟件DNAStar以及SOPMA網絡服務器,分析了3個牛乳β-乳球蛋白構象性表位氨基酸結構特征,它們主要是極性氨基酸。與預測的牛乳β-乳球蛋白的親水性、表面可