乙型肝炎病毒X蛋白對(duì)MMPs及TIMPs表達(dá)的影響.pdf

1、肝癌(HepatocellularCarcinoma，HCC)的侵襲轉(zhuǎn)移與基質(zhì)金屬蛋白酶(MatrixMetalloproteinases，MMPs)密切相關(guān)。研究表明，乙型肝炎病毒X蛋白mepatitisBvirusXprotein，HBx)可增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的侵襲能力[1,2,3，與其促進(jìn)MMP3、MMP9及MMPl4的表達(dá)有關(guān)。在人類基因組中已發(fā)現(xiàn)23個(gè)基因編碼表達(dá)23種MMPs，其酶活性受基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子(tissuein

2、hibitors0fmetalloproteinases，TIMPs)的抑制。本研究擬通過(guò)構(gòu)建HBx真核表達(dá)載體，全面、綜合分析HBx對(duì)MMPs及TIMPs表達(dá)的影響。 本研究第一部分旨在構(gòu)建HBx真核表達(dá)載體，并證實(shí)其在肝細(xì)胞中的表達(dá)。為此將B基因型乙型肝炎病毒X基因克隆到pcDNA3．1／HisC真核表達(dá)載體(重組載體為pcDNA3．1／HisC-XB)并瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，以Anti-Xpress抗體進(jìn)行Western

3、Blot檢測(cè)融合蛋白，證實(shí)HBx蛋白可在HepG2細(xì)胞中表達(dá)。 本研究第二部分以pcDNA3．1／HisC及pcDNA3．1／HisC-XB分別轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，G418篩選出抗性細(xì)胞克隆。半定量RT-PCR結(jié)果表明HBx蛋白可促進(jìn)MMP2、7、13、14、16、17、19、23、24及TIMPl、4基因的轉(zhuǎn)錄，抑制MMPl、3、8、9、10、11、12、15、20及TIMP2、3基因的轉(zhuǎn)錄。明膠酶譜、膠原酶譜檢測(cè)結(jié)果顯示，H