肝細(xì)胞移植治療失代償期肝硬化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、肝細(xì)胞移植(HCT)是治療暴發(fā)性或急性肝功能衰竭及某些和肝臟有關(guān)的代謝性疾病的一種有效的方法。它的應(yīng)用，使得費(fèi)用昂貴、死亡率高且供體有限的肝移植術(shù)有了一種暫時(shí)替代的療法。我國(guó)有眾多的失代償期肝硬化的患者需要肝移植，但因各種原因此類患者多在等待肝移植過(guò)程中死亡，因此HCT對(duì)肝移植需求量較大的我國(guó)具有更大的意義，但有關(guān)HCT對(duì)失代償期肝硬化的治療作用報(bào)道甚少，國(guó)內(nèi)未見。 目的：1.探索一種可以制備穩(wěn)定的大鼠失代償期肝硬化模型的方法；

2、2.評(píng)價(jià)HCT對(duì)失代償期肝硬化大鼠的治療作用；3.觀察HGF對(duì)移植入脾內(nèi)的肝細(xì)胞凋亡的影響。 方法：1.對(duì)120只150～200g的SD大鼠應(yīng)用改良的多因素綜合法進(jìn)行造模，以高度白酒(56％酒精度)代替乙醇配制飲用水，根據(jù)體重下降的情況確定每次注射CCl4的劑量，以B超證實(shí)大鼠的腹水。2.選用250～300gSD大鼠20只，按照半原位酶法分離肝細(xì)胞并制成單個(gè)肝細(xì)胞懸液。3.按照紅細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)算每毫升細(xì)胞懸液中細(xì)胞數(shù)及總數(shù)，即為肝

3、細(xì)胞產(chǎn)量，應(yīng)用0.4％的臺(tái)盼藍(lán)等滲液計(jì)算肝細(xì)胞成活率。當(dāng)肝細(xì)胞成活率≥85％時(shí)，方可進(jìn)行HCT。4.70只大鼠于造模成功后1周行HCT，分為3組，第1組為肝細(xì)胞移植組(T1組，30只)，每鼠移植的肝細(xì)胞數(shù)量為4.0×107個(gè)(2×107個(gè)/m1)；第二組為HCT+HGF(T2組，30只)，在T1組基礎(chǔ)上予HGF(5mg/100g)鼠尾靜脈緩慢靜推，前4周1次/d，后為1次/2d，直至試驗(yàn)結(jié)束。第3組為對(duì)照組(P組，10只)，每鼠注射生理

4、鹽水2ml。5.實(shí)驗(yàn)后每周測(cè)量大鼠體重，計(jì)算死亡率。在第1、2、4、8、12周，以細(xì)玻璃管于眼球后動(dòng)脈抽取血液標(biāo)本查丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總膽紅素(TSB)、白蛋白(ALB)及凝血酶原時(shí)間(PT)。6.P組在大鼠死亡后，T1、T2組在大鼠死亡時(shí)及試驗(yàn)后第4、8、12周累計(jì)處死大鼠各10只，留取肝、脾，肺標(biāo)本，HE染色后行常規(guī)病理檢查。對(duì)T1、T2組行TUNEL法原位細(xì)胞凋亡染色并測(cè)定凋亡指數(shù)(AI). 結(jié)果：1.經(jīng)過(guò)30～32

5、周的造模，成功制備出合并腹水的肝硬化大鼠。2.HCT后第4周，T1組(93.53％)、T2組(90％)的存活率均顯著高于P組(10％)，(P均＜0.05)，T1、T2組間無(wú)顯著差異。3.從HCT后第2周起，P組的體重顯著低于T1及T2組(P均＜0.05)；而第10周起T1組的體重顯著低于T2組(P均＜0.05)。4.從HCT后第1周起P組的ALT水平，第2周起ALB、TSB、PT值與T1、T2組相比有顯著差異(P均＜0.05)。T1組的