三種基于逆轉(zhuǎn)座子分子標(biāo)記技術(shù)體系的建立及其在蘋果芽變鑒定中的應(yīng)用.pdf

1、逆轉(zhuǎn)座子通過RNA為中介進(jìn)行轉(zhuǎn)座，在植物基因組中分布廣泛，拷貝數(shù)多，異質(zhì)高，在種內(nèi)和種間表現(xiàn)出較高的序列差異性和豐富的插入多態(tài)性，而且其引起的突變?yōu)榉€(wěn)定突變，針對(duì)這些特點(diǎn)開發(fā)出的幾種分子標(biāo)記與常規(guī)分子標(biāo)記比較，其優(yōu)勢(shì)在于能覆蓋全基因組，揭示的多態(tài)性更豐富，在遺傳多樣性和系譜研究、遺傳連鎖圖譜構(gòu)建及性狀基因定位方面具有很大的發(fā)展?jié)摿Α?蘋果(Malus)是果樹中最易發(fā)生芽變的樹種之一。目前生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用的許多優(yōu)良品種和品系都是通過

2、芽變選種獲得的，全世界蘋果總產(chǎn)量中大約有一半左右來源于芽變品種。芽變?cè)谔O果的優(yōu)良品種的選育上起著極其重要的作用。但是常規(guī)方法來鑒別蘋果芽變品種相對(duì)困難，本文通過建立和優(yōu)化的蘋果IRAP、REMAP標(biāo)記體系并結(jié)合SSAP標(biāo)記對(duì)蘋果芽變品種進(jìn)行鑒定，主要研究結(jié)果如下： 1、通過蘋果逆轉(zhuǎn)座子長末端重復(fù)序列(LTRs)保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，對(duì)影響蘋果IRAP和REMAP反應(yīng)體系的重要因素進(jìn)行了研究：建立并優(yōu)化了蘋果IRAP和REMAP分子標(biāo)

3、記技術(shù)體系。優(yōu)化的蘋果IRAP標(biāo)記體系為：25μL反應(yīng)體系中，模板DNA50ng、25mmol/LMgC122.5μL、dNTP2.0μL、10xBuffer2.5μL、Taq DNA聚合酶1.0U、10μmol/L引物0.8μL。優(yōu)化的蘋果REMAP標(biāo)記體系為：基因組DNA50ng、25mmol/L MgC122.5μL、dNTP2.0pL、10×Buffer2.5μL、Taq DNA聚合酶1.0U、10μmol/L LTR引物0.8

4、μL、10μmol/L ISSR引物0.8μL。 2、通過建立的IRAP和REMAP標(biāo)記體系對(duì)蘋果富士系和元帥系芽變品種進(jìn)行了鑒定，利用SSAP技術(shù)對(duì)蘋果富士系芽變品種進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明：IRAP分析中引物L(fēng)7在富士系芽變中具有多態(tài)性，引物L(fēng)1在元帥系芽變上具有多態(tài)性；REMAP分析中僅有引物組合L1/P5在富士系芽變品種中表現(xiàn)出一定的多態(tài)性；SSAP技術(shù)對(duì)蘋果普通富士及其14個(gè)芽變品種進(jìn)行的研究中，從60對(duì)引物中篩選出的6對(duì)