人胎兒表皮干細(xì)胞的分離培養(yǎng)、基因轉(zhuǎn)染及向毛囊的定向分化.pdf

1、研究目的:該課題的研究目的是利用毛乳頭細(xì)胞誘導(dǎo)表皮干細(xì)胞分化為毛囊,利用胎兒皮膚細(xì)胞為種子細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚以最大限度地降低免疫原性,同時(shí)嘗試將外源基因轉(zhuǎn)染至表皮干細(xì)胞,為表皮干細(xì)胞應(yīng)用于基因治療提供初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù).研究結(jié)論:1.人胎兒表皮干細(xì)胞在人胎兒真皮毛乳頭細(xì)胞的誘導(dǎo)下可定向分化為毛囊,真皮成纖維細(xì)胞不具備誘導(dǎo)毛囊的功能.2.人胎兒表皮干細(xì)胞膜片為表皮層,接種人胎兒毛乳頭細(xì)胞的膠原纖維凝膠為真皮層構(gòu)建的組織工程皮膚可有效修復(fù)裸鼠

2、全層皮膚缺損.3.Ⅳ型膠原快速粘附法可有效分離和富集人胎兒表皮干細(xì)胞,以人胎兒成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)液配制的干細(xì)胞培養(yǎng)液可有效維持人胎兒表皮干細(xì)胞體外增殖和未分化狀態(tài).4.人胎兒表皮干細(xì)胞可被脂質(zhì)體介導(dǎo)的p cDNA3.1-VEGF165轉(zhuǎn)染,可被重組腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染,但如何維持目的基因的長(zhǎng)期表達(dá)仍有待研究.5.機(jī)械分離+膠原酶消化法分離毛乳頭,角質(zhì)形成細(xì)胞條件培養(yǎng)液培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞,是體外分離培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞的高效、簡(jiǎn)便、

3、經(jīng)濟(jì)、可重復(fù)性強(qiáng)的方法.創(chuàng)新點(diǎn):1.以人胎兒毛乳頭細(xì)胞誘導(dǎo)人胎兒表皮干細(xì)胞分化為毛囊.2.以脂質(zhì)體為載體介導(dǎo)外源的VEGF1 6 5基因轉(zhuǎn)染人胎兒表皮干細(xì)胞,以腺相關(guān)病毒為載體介導(dǎo)外源的GFP基因轉(zhuǎn)染人胎兒表皮干細(xì)胞,為人胎兒表皮干細(xì)胞用作基因治療的靶細(xì)胞提供初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù).3.器械分離結(jié)合膠原酶消化法,較傳統(tǒng)的顯微器械分離法,分離毛乳頭的效率提高了1 0倍以上,且毛乳頭細(xì)胞貼壁快,縮短了原代培養(yǎng)的時(shí)間.采用角質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)液,增加了毛