人胎兒間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化為類肝細(xì)胞的實驗研究.pdf

1、目的:1.建立人胎兒骨髓、臍帶血和肝臟間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的分離培養(yǎng)方法,觀察細(xì)胞生物學(xué)特性和細(xì)胞表型,獲得大量的人源性MSCs.2.人胎兒MMSCs體外向類肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化的條件建立及優(yōu)化.3.人胎兒MMSCs來源類肝細(xì)胞的分子生物學(xué)鑒定.4.人胎兒MMSCs來源類肝細(xì)胞的功能和超微結(jié)構(gòu)評估.結(jié)論:人胎兒MMSCs分離成分單純,容易成功,增生旺盛,作為組織工程重建的種子細(xì)胞具有較強的可行

2、性.從臍帶血中成功分離MSCs的幾率為20﹪,但臍帶血來源廣泛,無倫理學(xué)爭議,所獲得的MSCs也具有良好的增殖能力,也可作為MSCs的來源.肝非實質(zhì)細(xì)胞中也含有MSCs,且量比較大,也可成為種子細(xì)胞.我們建立了多條獲取人源性MSCs的途徑,為MSCs的分化及大規(guī)模臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ).通過比較三種來源MSCs各自的優(yōu)點和不足,我們選擇人胎兒骨髓來源的MSCs進行體外誘導(dǎo)分化.細(xì)胞分化受細(xì)胞基質(zhì)、細(xì)胞因子、細(xì)胞密度等影響,在無血清培養(yǎng)條件下,

3、設(shè)計了多組誘導(dǎo)方案,證實按誘導(dǎo)4組的方案1﹪Matrigel作基質(zhì),2.5μmol/ml AZA預(yù)處理10~12h,HGF 10ng/ml+FGF4 10ng/ml+HGM培養(yǎng)基可獲得61﹪~65﹪的類肝細(xì)胞.MMSCs經(jīng)誘導(dǎo)后于第4d時表達GATA4、CK19、AFP;第7d后以時間依賴方式表達原始、成熟肝細(xì)胞標(biāo)志CK18、ALB、GST-π和HNF1α.MMSCs向類肝細(xì)胞的橫向分化是先分化為肝前體細(xì)胞,再分化為成熟肝細(xì)胞,在該實驗