類風濕關(guān)節(jié)炎基因表達譜研究及脂連素、脂連素受體基因在其發(fā)病中的意義.pdf

1、類風濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)是臨床常見的慢性炎性自身免疫病，以多關(guān)節(jié)炎癥、滑膜增生和骨侵蝕為基本特征，發(fā)病率在0.37～1％左右，致殘率高，無論在發(fā)達國家還是發(fā)展中國家，都是沉重的社會和經(jīng)濟問題。近20年來，盡管對RA的基礎(chǔ)和臨床研究不斷深入，但是尋找敏感可靠的診斷標記和新的治療干預靶標仍然是臨床面臨的挑戰(zhàn)性問題。 第一部分 類風濕關(guān)節(jié)炎基因表達譜研究 目的：運用基因芯片技術(shù)研究RA基因

2、表達譜特征，從全基因組角度探討RA相關(guān)致病基因，尋找新的診斷標記和治療靶標。 方法：提取10例活動期RA患者和3例健康志愿者PBMC中總RNA，Illumina寡核苷酸基因芯片分析每個樣本的48.000個基因變化。RT-PCR驗證芯片結(jié)果。運用生物信息學技術(shù)，進一步分析差異表達基因意義。 結(jié)果：RA病人與健康對照者相比2倍上調(diào)基因122個，2倍下調(diào)基因29個。分子及生物功能分析顯示上調(diào)表達的基因涉及細胞因子、趨化因子、細

3、胞周期、細胞凋亡、蛋白翻譯合成、代謝、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導等基因種類。 結(jié)論：RA涉及多環(huán)節(jié)的病理過程，基因芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)了多個RA相關(guān)基因，深入研究這些基因在RA中的意義，有利于進一步理解RA分子機制，發(fā)現(xiàn)新的診斷標記和治療靶標。 第二部分 脂聯(lián)素及其受體在類風濕關(guān)節(jié)炎中的表達 目的：研究脂聯(lián)素(Adiponectin，AD)及其受體1，2(Adiponectin receptor,AdipoR1，AdipoR2)

4、基因在RA中的表達情況及其意義。 方法： 1.運用Real-time PCR分析RA、骨關(guān)節(jié)炎(Osteroarthritis，OA)、健康志愿者PBMC中，RA、OA滑膜組織中AD、AdipoR1、AdipoR2 mRNA表達情況。 2.運用Westem-blot及免疫組織化學分析RA、OA滑膜組織中AD、AdipoR1、AdipoR2蛋白表達情況。 3.運用ELISA測定RA、OA及健康志愿者血清中，

5、RA、OA關(guān)節(jié)液中AD及細胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNFα、MCP-1和MMP9的含量。 4.以重組人AD因子刺激滑膜成纖維細胞，ELISA測定細胞培養(yǎng)上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNFα、MCP-1和MMP9的含量。 5.以重組人AD因子Wistar大鼠關(guān)節(jié)腔注射，評價誘導關(guān)節(jié)炎癥情況。 結(jié)果： 1.RA PBMC和滑膜組織中AdipoR1 mRNA表達明顯高于OA及健康對照組

6、(p<0.05)。AdipoR2 mRNA在RA和對照組的PBMC及滑膜組織中表達無明顯差異。ADmRNA在各組PBMC中未能檢測到表達，但RA滑膜組織表達中明顯高于OA中(p<0.05)。 2.RA滑膜組織中AD和AdipoR1蛋白表達量明顯高于OA組織中，AdipoR2在RA和OA組織中表達無明顯差別。 3.RA、OA及健康志愿者血清中AD含量無明顯差別，但是RA關(guān)節(jié)液中AD含量明顯高于OA中(p<0.05)。關(guān)節(jié)液

7、中AD含量和關(guān)節(jié)液IL-6水平及病程正相關(guān)。 4.以重組人AD因子刺激滑膜成纖維細胞24小時后，能誘導滑膜細胞選擇性分泌IL-6和MCP-1。 5.以重組人AD因子大鼠關(guān)節(jié)腔注射后，關(guān)節(jié)腔及滑膜周圍見炎性細胞浸潤。 結(jié)論：AD具有促炎因子屬性，AD和其受體AdipoR1基因在RA滑膜組織和關(guān)節(jié)液中高表達表明其參與了RA的病理過程。 研究意義及創(chuàng)新點： 1.通過基因芯片技術(shù)對RA病人PBMC進行全基因組分析