HA、Hase、RGD和Integrinβ1 asODN阻斷胃癌細(xì)胞系SGC7901粘附、侵襲ECM的體外實驗研究.pdf

1、中文摘要前言腹膜轉(zhuǎn)移是進(jìn)展期胃癌根治術(shù)后最常見的復(fù)發(fā)形式，是導(dǎo)致死亡的重要原因。Ow究表明，多種粘附分子介導(dǎo)的癌細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)相互作用是誘發(fā)侵襲和轉(zhuǎn)移的前提條件，其中CD44和Integrin甲是介導(dǎo)胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移的主要和獨立的粘附分子。CD44是一類細(xì)胞表面糖蛋白，發(fā)揮多種生理及病理作用，它可以特異性識別其配體透明質(zhì)酸(HA)，影響腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。HA是基本結(jié)構(gòu)單一的糖胺多糖，是ECM的主要結(jié)構(gòu)分子，其表達(dá)與腫瘤細(xì)胞行為間

2、有一定的聯(lián)系。Integrin阻是由。、p亞單位通過二硫鍵形成的異質(zhì)性二聚體跨膜糖蛋白，可以與ECM成分及細(xì)胞骨架結(jié)合而形成配體一Integrin田一細(xì)胞骨架跨膜信息系統(tǒng)，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的粘附和轉(zhuǎn)移，主要機制是識別ECM蛋白上的RGD重復(fù)序列。RGD是由精氨酸一甘氨酸一天冬氨酸殘基構(gòu)成的三膚，是纖連蛋白(FN)等ECM蛋白的功能結(jié)構(gòu)。Y本研究從CD44和Inte護(hù)n田人手，重點探討不同水平聯(lián)合阻斷胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系SGC7901粘附、侵襲E

3、CM的效果，旨在探尋阻斷治療的可行途徑。實驗材料以人胃癌細(xì)胞系SGC一7901為研究對象。主要儀器包括:超凈工作臺，CO:培養(yǎng)箱，Boyden小室，低溫超速離心機，PCR儀，電泳儀，凝膠自動成像儀，F(xiàn)CM等。主要試劑包括:DMEM培養(yǎng)基，MatrigelHAHaseRGD膚，抗CD44及Integrinp1單抗，F(xiàn)ITC一山羊抗小鼠IgG，硫代磷酸修飾的寡核昔酸(ODN)序列，LipofectinReagentTRIZOLReagent

4、ReverseTranscriptionSystemA3500達(dá)曲線明顯左移，提示Integrin田mRNA及蛋白表達(dá)有不同程度的降低5.粘附和侵襲實驗證明，Integrinp1asODN轉(zhuǎn)染SGC7901后顯著降低其粘附力及侵襲力(P0.001)，抑制率分別為54%和76%，效果明顯優(yōu)于隨機序列(P0.001)o討論癌的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個多因素、多步驟、多階段的復(fù)雜過程。參與調(diào)節(jié)的因子中CD44和Integrinol是兩個獨立作用的因子

5、。本研究在多水平聯(lián)合阻斷胃癌的粘附和侵襲，以探尋其對阻斷胃癌粘附和侵襲ECM的療效。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系SGC7901不僅表達(dá)CD44和Integrin田蛋白，而且二者都是功能性蛋白。以不同順序聯(lián)合應(yīng)用二者以Hase十HA組效果較好，聯(lián)合三者阻斷的效果優(yōu)于任何單一因素及聯(lián)合應(yīng)用HA和Hase，究其原因系CD44和Integrinpl是兩個獨立作用的粘附因子，同時阻斷可有加和作用，提示聯(lián)合應(yīng)用粘附抑制劑是胃癌抗粘附治療的一個新的著眼

6、點。用硫代磷酸修飾的Integrin田asODN以脂質(zhì)體為載體轉(zhuǎn)染SGC7901，可見其順利進(jìn)人細(xì)胞，均勻分布于胞漿及胞核，SGC7901的IntegrinplmRNA和蛋白表達(dá)均下降，對ECM的粘附和侵襲也下降，效果均優(yōu)于隨機序列。上述結(jié)果提示Integrin甲asODN可能在胞漿和胞核中同時起作用，通過多種機制引起SGC7901Inte幼n因mRNA及蛋白表達(dá)下降，在此基礎(chǔ)上，降低其粘附力和侵襲力，證實了以脂質(zhì)體為載體轉(zhuǎn)染硫代磷酸修