siRNA抑制SGC7901細(xì)胞系肝素酶表達(dá)及抑制其侵襲轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、目的： 經(jīng)多體外RNAi實(shí)驗(yàn)篩選肝素酶靶向的高效siRNA分子，并以此抑制SGC7901細(xì)胞系肝素酶的表達(dá)，并通過體外侵襲實(shí)驗(yàn)和動物實(shí)驗(yàn)，觀察SGC7901細(xì)胞系肝素酶表達(dá)抑制后侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化。 方法： 聯(lián)合應(yīng)用生物信息學(xué)技術(shù)與高效siRNA設(shè)計(jì)原則進(jìn)行siRNA分子設(shè)計(jì)，并通過體外轉(zhuǎn)錄與化學(xué)合成小干擾RNA(siRNA)，經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞系；結(jié)合RT-PCR，Real-Time PCR，Western印

2、跡檢測RNA干擾效率；通過體外侵襲實(shí)驗(yàn)與動物實(shí)驗(yàn)分別評價(jià)肝素酶RNAi后胃癌細(xì)胞系的侵襲與腹膜轉(zhuǎn)移能力變化。 結(jié)果： siRNA轉(zhuǎn)染濃度40nmol/L，作用48小時(shí)，HPA mRNA抑制率經(jīng)半定量RT-PCR檢測已達(dá)(79±6.9)％，經(jīng)Real-Time PCR檢測，RNAi效率相對空白對照達(dá)88.4％，相對于陰性對照達(dá)58.1％，作用72小時(shí)Western Blotting未檢測到HPA蛋白表達(dá)，且siRNA干涉效

3、率具有轉(zhuǎn)染濃度依賴性。侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HPA干擾組與對照組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<,1>=0.018；P<,2>=0.022；P<,3>=0.028)。HPA干擾組侵襲抑制率3次實(shí)驗(yàn)分別為(57±40)％，(68±42)％，(59±29)％，平均抑制率為(61±36)％。HPA穩(wěn)定RNAi細(xì)胞株腹膜轉(zhuǎn)移能力檢測：經(jīng)腹腔注射SGC7901細(xì)胞與HPA穩(wěn)定RNAi的細(xì)胞株及其對照細(xì)胞株2周后，解剖觀察腹膜成瘤情況，以組間轉(zhuǎn)移瘤總重量作T

4、amhane’s T2(方差不齊)檢驗(yàn)衡量細(xì)胞株的轉(zhuǎn)移能力，每組5只裸鼠。2周后空白對照組與陰性對照組在轉(zhuǎn)移瘤總重量上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，實(shí)驗(yàn)組與陰性對照組間在轉(zhuǎn)移瘤總重量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論： 1、序列為5’GAACAGCACCUACUCAAGAUU3’(正義鏈)的siRNA分子可特異性抑制SGC7901細(xì)胞系HPA的表達(dá)； 2、當(dāng)轉(zhuǎn)染濃度為40nmol/L，作用時(shí)間為48小時(shí)，HPA靶向siRNA可產(chǎn)生較強(qiáng)的基因沉