二氯化鈷對胃癌細胞SGC7901凋亡和增殖的影響.pdf

1、研究背景及目的：惡性腫瘤在生長過程中，由于組織增殖過快造成局部組織嚴重缺氧和能量代謝不平衡。腫瘤細胞的失控性生長和極度的機體耗能，不僅導致細胞生存微環(huán)境的改變，也導致細胞的供能方式發(fā)生變化，以有氧氧化為主轉變?yōu)橐蕴墙徒鉃橹鳌Ｄ[瘤細胞代謝異常和糖酵解增強的原因十分復雜，其中，線粒體作為細胞的能量供應站，它所承擔的有氧供能發(fā)生障礙可能是主要原因之一。腫瘤細胞利用葡萄糖作為能源，糖酵解增加，生物能量學可能是是腫瘤惡性轉化的核心。實驗室前期建立

2、的胃癌差異基因表達譜顯示，除了參與細胞增殖、分化、凋亡基因的表達異常外，有大量與物質和能量代謝有關的基因在腫瘤中發(fā)生了異常表達。我們對胃癌基因表達譜中鑒定出的一組參與糖代謝關鍵酶的基因進行分析，發(fā)現(xiàn)胃癌組織中參與糖酵解過程的己糖激酶、丙酮酸激酶表達上調，而參與糖異生過程的果糖-1，6-二磷酸酶（FBPase）表達下調。由于己糖激酶Ⅱ（HexoxinaseⅡ，HKⅡ）的差異表達與胃癌的關系密切，我們選擇己糖激酶進行進一步研究。為了進一步明

3、確缺氧對腫瘤能量代謝及生物學功能的影響，我們采用二氯化鈷（CobaltChloride，CoCl2）處理SGC7901細胞,模擬胃癌在體內的缺氧環(huán)境，觀察缺氧條件下己糖激酶Ⅱ和缺氧誘導因子-1α（hypoxiainducedfactor-1alpha，HIF-1α）在胃癌細胞中的表達情況，及缺氧對胃癌細胞生物學行為的影響，以探討胃癌細胞低氧適應的可能機制。
　　方法：以二氯化鈷作為缺氧模擬劑，利用RT-PCR、免疫熒光及Weste

4、rnblotting法檢測SGC7901細胞HKⅡ和HIF-1α在轉錄水平和翻譯水平上的表達；流式細胞儀檢測SGC7901細胞在不同缺氧程度下的細胞凋亡率；MTT法觀察SGC7901細胞的增殖情況；乳酸測定試劑盒測定乳酸含量；ROS測定試劑盒測定ROS含量。
　　結果：實驗結果顯示二氯化鈷處理SGC7901細胞后，能夠明顯增強SGC7901細胞中HKⅡ和HIF-1αmRNA及蛋白水平的表達。缺氧條件下細胞的生長和增殖能力均增強，劃

5、痕愈合實驗表明缺氧條件下細胞向劃痕處遷移的速度加快，缺氧時細胞的凋亡減少。這些結果表明缺氧時腫瘤的惡性增殖能力增強，同時，乳酸和ROS含量均增加，提示胃癌細胞可通過HKⅡ的高表達和線粒體的損傷激活糖酵解途徑。
　　結論：SGC7901用二氯化鈷處理后，可以明顯增強細胞的惡性增殖和遷移侵襲能力，胃癌中氧供的改變和ROS水平的變化可能是細胞的抗氧化能力降低和氧化損傷的分子事件，其中ROS增加導致的呼吸鏈損傷可能是細胞的有氧供能障礙的誘