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文檔簡介
1、第一部分人胃癌組織中miR-218的表達及臨床意義
目的:
探討人胃癌組織中miR-218的表達變化及臨床意義。
方法:
收集經(jīng)病理證實的30例新鮮胃癌癌組織及與之配對的30例正常胃組織,用液氮罐轉(zhuǎn)運至﹣80℃冰箱用于提取總RNA。應用實時定量PCR(Real time RT-PCR)檢測30例胃癌癌組織和與其匹配的30例正常胃組織中miR-218表達水平,分析miR-218與胃癌臨床病理分級的相
2、關性。
結(jié)果:
相對于正常胃組織,RT-PCR結(jié)果提示miR-218在腫瘤組織中的表達顯著低于在正常組織中的表達(P<0.0001)。T1/T2期miR-218平均表達量高于T3/T4期平均表達量(P=0.002)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者miR-218的平均表達明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P=0.005)。Ⅲ期和Ⅳ期患者miR-218平均表達量低于I期和II期患者(P=0.018)。miR-218表達量與性別、年齡、腫瘤大小
3、、腫瘤部位、分化程度無明顯相關性。
結(jié)論:
胃癌癌組織中miR-218表達明顯減少,miR-218的表達與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期等參數(shù)呈負相關,miR-218的表達水平對評價胃癌預后有重要參考價值。
第二部分溫熱化療上調(diào)miR-218表達抑制SGC7901細胞增殖和侵襲的機制
目的:
研究溫熱化療上調(diào)miR-218表達對胃癌SGC7901細胞增殖和侵襲的影響及可能的機制。
4、 方法:
0~10μg/mL的順鉑和43℃處理人胃癌SGC7901細胞株,設一組不做任何處理的空白對照,MTS法檢測細胞生長情況及IC50值,Western-blot檢測相關凋亡蛋白表達。應用Transwell小室體外侵襲實驗檢測溫熱化療后細胞侵襲能力的改變。RT-PCR和Western blot分別檢測miR-218的預測靶基因Gli2-mRNA、E-cadherin-mRNA和蛋白表達水平。應用雙熒光素酶分析方法鑒定mi
5、R-218和Gli23'UTR的表達調(diào)節(jié)關系。
結(jié)果:
溫熱化療后SGC7901細胞增殖能力減弱,凋亡增加;Transwell體外實驗提示溫熱化療后SGC7901細胞侵襲能力減弱;溫熱化療處理SGC7901細胞后miR-218表達量上調(diào),Gli2-mRNA和蛋白表達量降低,E-cadherin-mRNA和蛋白表達量上升。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炞C實miR-218通過直接與Gli2-mRNA3'UTR結(jié)合負性調(diào)節(jié)其表達。
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