溫?zé)峄熒险{(diào)miR-218表達抑制胃癌細胞SGC7901增殖和侵襲的機制研究.pdf

1、第一部分人胃癌組織中miR-218的表達及臨床意義
　　目的：
　　探討人胃癌組織中miR-218的表達變化及臨床意義。
　　方法：
　　收集經(jīng)病理證實的30例新鮮胃癌癌組織及與之配對的30例正常胃組織，用液氮罐轉(zhuǎn)運至﹣80℃冰箱用于提取總RNA。應(yīng)用實時定量PCR（Real time RT-PCR）檢測30例胃癌癌組織和與其匹配的30例正常胃組織中miR-218表達水平，分析miR-218與胃癌臨床病理分級的相

2、關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　相對于正常胃組織，RT-PCR結(jié)果提示miR-218在腫瘤組織中的表達顯著低于在正常組織中的表達（P<0.0001）。T1/T2期miR-218平均表達量高于T3/T4期平均表達量（P=0.002）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者miR-218的平均表達明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P=0.005）。Ⅲ期和Ⅳ期患者miR-218平均表達量低于I期和II期患者（P=0.018）。miR-218表達量與性別、年齡、腫瘤大小

3、、腫瘤部位、分化程度無明顯相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　胃癌癌組織中miR-218表達明顯減少，miR-218的表達與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期等參數(shù)呈負相關(guān)，miR-218的表達水平對評價胃癌預(yù)后有重要參考價值。
　　第二部分溫?zé)峄熒险{(diào)miR-218表達抑制SGC7901細胞增殖和侵襲的機制
　　目的：
　　研究溫?zé)峄熒险{(diào)miR-218表達對胃癌SGC7901細胞增殖和侵襲的影響及可能的機制。

4、　　方法：
　　0～10μg/mL的順鉑和43℃處理人胃癌SGC7901細胞株，設(shè)一組不做任何處理的空白對照，MTS法檢測細胞生長情況及IC50值，Western-blot檢測相關(guān)凋亡蛋白表達。應(yīng)用Transwell小室體外侵襲實驗檢測溫?zé)峄熀蠹毎忠u能力的改變。RT-PCR和Western blot分別檢測miR-218的預(yù)測靶基因Gli2-mRNA、E-cadherin-mRNA和蛋白表達水平。應(yīng)用雙熒光素酶分析方法鑒定mi

5、R-218和Gli23'UTR的表達調(diào)節(jié)關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　溫?zé)峄熀骃GC7901細胞增殖能力減弱，凋亡增加；Transwell體外實驗提示溫?zé)峄熀骃GC7901細胞侵襲能力減弱；溫?zé)峄熖幚鞸GC7901細胞后miR-218表達量上調(diào)，Gli2-mRNA和蛋白表達量降低，E-cadherin-mRNA和蛋白表達量上升。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炞C實miR-218通過直接與Gli2-mRNA3'UTR結(jié)合負性調(diào)節(jié)其表達。